核心提示：诺如病毒(NoV)是急性胃肠炎(AGE)的主要原因，每年在全球造成6.85亿例感染和21万人死亡。人类主要受GI、GII和GIV基因群的感染。由于NoV的遗传和抗原多样性，每1至2年就会出现一次新的流行株。
2022年5月，康华生物联合四川大学&天津医科大学合作发表了一款基于毕赤酵母表达系统的六价诺如病毒疫苗临床前研究数据，是目前在研价次最高的多价诺如病毒疫苗，比此前已经上临床的智飞生物四价诺如病毒疫苗多了两价。该疫苗涵盖了GI.1、GII.2、GII.3、GII.4、GII.6、GII.17六个基因型，结合铝佐剂在小鼠体内进行了免疫原性概念验证研究[1]。
诺如病毒(NoV)是急性胃肠炎(AGE)的主要原因，每年在全球造成6.85亿例感染和21万人死亡。人类主要受GI、GII和GIV基因群的感染。由于NoV的遗传和抗原多样性，每1至2年就会出现一次新的流行株。疫苗接种通常被认为是预防传染病的最好方法，但与NoV相关疫苗的研发一直是国际性难题。
研究人员采用基因工程技术，利用毕赤酵母作为异源蛋白表达系统，分别表达了6种NoV的衣壳蛋白VP1，而后，经高密度发酵、收集菌体等方式，获得6种病毒样颗粒的单价蛋白原液。将单价蛋白原液与佐剂混合最终制备出六价重组NoV疫苗，即完成了病毒疫苗临床前的研发工作。之后应用制备的六价重组疫苗进行小鼠免疫实验，按照计量递增的方式将Hexa-VLPs+PBS混合并进行注射。为了比较六价VLP和单价VLP疫苗的免疫效果，同时注射了单价VLP作为对照组(原图2-4)。对所获得的的抗血清采用酶联免疫吸附法与单价GI.1、GII.2、GII.3、GII.4、GII.6和GII.17 VLP的结合效果进行比较，并采用阻断测定法评估抗血清阻断VLP与组织血型抗原(HBGA)相互作用的能力。
原图2-4 小鼠免疫方案
原图2 由不同剂量的六价VLP诱导的NoV特异性IgG抗体应答
原图3 不同Hexa-VLPs剂量诱导的NoV基因型特异性阻断抗体反应
原图5 不同免疫方案的抗血清阻断试验
通过毕赤酵母表达系统表达出6个不同基因型的VLP，使用蛋白质印迹和电子显微镜进行验证。用不同剂量的六价VLP+明矾进行免疫。六价VLP免疫后小鼠显示出强烈的基因型特异性IgG反应。在2 w时IgG的趋势显着增加，在6-8 w达到峰值，然后在疫苗接种后12 w处稍有减弱(原图2)。高水平的血清阻断抗体与临床NoV胃肠炎的保护相关，作为病毒附着因子的HBGA具有重要作用。阻断VLP与HBGA结合的抗体可能具有中和活性，并且HBGA阻断抗体水平可以用来替代中和抗体的水平。所有剂量的六价VLP均诱导了显著的型特异性阻断抗体反应，并显示出了与结合抗体同步的趋势(原图3)。使用VLP-粘蛋白结合阻断试验检测对(A)GI.1-(F)GII.17 VLP的阻断抗体，与单剂量方案相比，使用两到三次六价VLP的连续免疫表现出更有利的免疫效应，单价VLP免疫没有检测到交叉阻断抗体所诱导的抗血清(原图5)，这进一步证实了研究新型多价疫苗的必要性。
VLP因具备自组装的免疫原性结构，使其在重组疫苗的开发中受到广泛关注。少数基于VLP的预防性疫苗已获得许可并在临床推广使用。截止目前，所有NoV候选疫苗都无法涵盖主要的流行菌株，这意味着迫切需要研发广谱性更高的NoV疫苗。该研究基于毕赤酵母表达体系制备了六价NoV疫苗。通过将祖先NoV GI.1与其他五种基因型菌株相结合，开发了一种新型的六价NoV疫苗来预防NoV感染。经验证Hexa-VLP在改善抗体数量的基础上拓宽了抗体库的广度，并且与单价疫苗相比，Hexa-VLP也没有显示出对NoV特异性功能抗体的抑制。然而，该研究还存在一些局限性。首先，没有测试针对六价NoV VLP疫苗中未包含的或突变基因型的异源阻断应答反应。其次，六价VLP疫苗只对BALB/c小鼠进行了免疫学评估，没有应用其他动物模型(如非人灵长类动物(NHPs))无法深入了解六价NoV VLP疫苗的有用性。总之，六价NoV VLP疫苗具有成为广谱NoV候选疫苗的潜力。
参考文献：
[1] Hou W, Lv L, Wang Y, et al. 6-Valent Virus-Like Particle-Based Vaccine Induced Potent and Sustained Immunity Against Noroviruses in Mice [J]. Front Immunol, 2022, 13: 906275.
