1、叶酸标准7.1标准曲线是以每个标准点的吸光值均值为纵坐标做标曲，每个标准点有2~3个平行，那么平行管之间的偏差是否有要求?VB12标准中有相关标曲各平行管间偏差要求，是否可以参照执行?

  答：平行管之间的偏差可以参考VB12的描述。

  2、VB12标准中19.8.5样品结果计算是算每支试管测得的浓度不得超过该编号待测液的均值的15%，那么各编号待测液的浓度值之间的偏差有没有要求?如果某个编号待测液3管之间偏差较小，但与其他3个编号的偏差较大，该如何进行数据取舍?比如计算出某样品的各管浓度值为①0.015，0.016，0.016;②0.020，0.021，0.022;③0.020，0.019，0.021;④0.022，0.021，0.020

  答：数据取舍参考标准表述。例子中①中的三支试管均超出所有试管的平均浓度的15%，可以将①全部舍去，剩余管数满足超过原来管数的2/3，舍去后再进行计算。

  3、国标试剂盒法与试剂盒(包埋菌株)区别，是否可以直接用包埋菌株与国标试剂盒法等同?

  答：国标未提及试剂盒法，市售商品化试剂盒菌株为包埋在微孔板底部，与国标描述的菌株活化过程不同，且两者样品前处理也有比较大的差异。使用商品化试剂盒前需要实验室进行验证。

  4、b12 国标曲线采用什么类型，国标一直未明确曲线。有用4P法的，有用二次曲线的，还有用指数方程的。老师推荐什么类型?

  答：国标给出了制作标准曲线的要素，按照描述自行选择方法进行标准曲线的绘制，建议每种类型都尝试然后选择适合自己实验室的方法，我们实验室采用的坐标纸手绘。

  5、乳粉中叶酸的测定，使用微孔板法配制标准曲线，相应的标准系列管中叶酸含量，是否需要作相应缩减?

  答：微孔板标准曲线配制参照试管法，体积按比例缩减至1.0mL，建议参考标准描述操作。

  6、叶酸的分析步骤，所有操作均需避光进行怎样来保证?

  答：叶酸易见光分解，尤其在标准品配制过程中，操作区域需避免阳光直射。

  7、标准曲线的绘制可不可以将每个标准浓度点3管的值都绘制上去，而不是采用各标准浓度平均值?

  答：标准要求每个梯度做三个平行，以每点均值计算。如果标准浓度点3管值都绘制上去，无法绘制标准曲线或者绘制多条标准曲线，无法从标准曲线上找到吸光度或透光率对应的维生素浓度。

  8、维生素B12中每管需要放置一颗玻璃珠，玻璃珠的作用是什么，有什么替代方法或者不加;维生素B12标准中需要4度冰箱，这个偏差范围有没有要求;标准品配制为10mg至1000mL容量瓶中，是否可以等比例缩小进行配制标准储备液;菌悬液测量吸光度值可以使用酶标仪进行测定，紫外分光光度计和酶标仪测定菌悬液是否有差异。

  答：加玻璃珠的目的是充分混匀，熟练操作后若能保证测数时充分震荡可以不加;实验室冰箱在正常冷藏温度范围即可，除了温度外还要注意避光以及定期对标准品的有效性进行监测;缩小比例按理说是可以的，只要实验室人员操作手法准确是没有问题的，但一般情况下是选择大体积更为准确;根据每个实验室的仪器设备和操作习惯的差异，可自行去验证。

  9、用试管法的标曲可以拿4p法作图吗?

  答：试管法的标曲是8个点，试剂盒提供5个点，可以修改试剂盒的软件公式也做8个点，但是试剂盒提供软件里面包含了样品的前处理稀释倍数，这个与国标法不同。

  10、结果计算的时候，国标要求是先算每个编号各平行管的浓度值，再进行数据取舍，算每个编号各平行管的平均值，再算各个编号的平均值。我们是否可以直接算出所有试管的浓度，根据管间偏差要求宿舍数据后算总平均值?

  答：首先直接算出所有试管的浓度会将你的工作量增加，浊度不符合要求的试管，在曲线上的数值也不会太理想，最后取舍后可能还会被淘汰，其次这样的计算方法不符合标准的要求。