前言

  凝固酶阳性葡萄球菌通常被认为具有一定的致病力的，常以共生体形式存在于人类和食用动物体内，可引起严重甚至致命疾病。金黄色葡萄球菌是最为常见的凝固酶阳性的葡萄球菌，因其携带了大量多种多样的毒力基因。而凝固酶阴性的葡萄球菌也会携带少量的毒力基因，通常定植在人类皮肤上，可导致人们的血液感染。因此，建立一种快速灵敏可靠的检测方法，用于鉴定金黄葡萄球菌和非金黄葡萄球菌。

  研究结果

  在本研究中，我们开发了一种多酶等温快速扩增结合双相定量PCR方法(duplex MIRA-qPCR)。它可以同时检测金葡菌种特异性保守基因FMN-bgsfp以及葡萄球菌属特异性保守基因tuf。该反应体系可在20分钟内39℃恒温扩增DNA。特异性实验结果显示，9株葡萄球属菌株均为tuf基因阳性携带，而非葡萄球菌属菌株均不携带该基因;金葡菌均携带FMN-bgsfp基因，而非葡萄球菌属以及非金葡菌的均不携带该基因，由此得出，duplex MIRA-qPCR检测方法具有较高的种属特异性。同时，对其进行灵敏度评价，结果显示，其最低检测限(LOD)为3x102CFU/mL。系数变异值为0.13%-2.09%，表明该检测方法具有良好的重复性。此外，可从4类样品中同时检测出9株葡萄球菌(包括金葡菌)，其LOD为8.56x103CFU/mL。总的来说，duplex MIRA-qPCR具有强大的特异性，检测限低，检测时间段以及操作简单等优点，可作为快速有效检测金葡菌以及非金葡菌的葡萄球菌属的工具。

  1. Lai, J.; Huang, Z.; Xiao, Y.; Yu, K.; Bai, X.; Gao, H.; Dai, H.; Liu, X.; Wang, D., Development and Evaluation of Duplex MIRA-qPCR Assay for Simultaneous Detection of Staphylococcus aureus and non-aureus Staphylococci. Microorganisms 2022, 10 (9).