H9N2亚型禽流感病毒是全球常见低致病性AIV，威胁家禽业，虽致病性低但易与其他病原体共感染致损失；我国虽有20多种获批灭活疫苗，但因血凝素（HA）抗原漂移，疫苗株与流行株常不匹配，保护效果下降。本研究通过突变关键氨基酸构建重组病毒，结合抗原图谱与单抗分析评估交叉保护潜力，筛选广谱保护疫苗候选株，实验设计严谨，涵盖病毒构建、免疫、血清学分析至动物攻毒保护的完整流程。

代表毒株的选择

图 1 H9N2代表毒株HA基因核苷酸序列的系统进化分析

本研究选取9株代表性H9N2病毒，覆盖中国当前主要流行抗原群，包括经典疫苗株F98（B-like谱系）、Group 1（B4.4/B4.6亚群）的RTX、W100318、W100405，以及Group 2（B4.7亚群）的W120118、W616G2、W110704、W05091、R040218；经系统进化分析显示，Group 1与Group 2的HA基因核苷酸同源性91.2%–94.8%，氨基酸同源性90.5%–95.1%。

图 2 H9N2代表毒株之间抗原漂移的三维抗原图谱分析

而抗原图谱分析显示，Group 1与Group 2之间的抗原距离为3.56–6.10 AU（抗原单位），而Group 1内部距离仅为0.77–1.24 AU。因此，这些毒株具有明显的抗原差异，适合用于评估疫苗的交叉保护效果。

关键抗原残基替换的影响

图 3 多位点突变株与H9N2代表毒株之间抗原漂移的三维抗原图谱

研究以W120118为背景，构建R118重组病毒及12个单点、6个多位点突变株。抗原图谱显示：单点突变中R118-164、R118-167、R118-197对抗原性影响最大；多位点突变中R118-A等4株更接近Group 1抗原特征，仅突变位点A的R118-A与Group 1抗原距离缩至1.14–1.96 AU，且仍识别Group 2。故研究者认为，修饰抗原位点A可拉近与Group 1的抗原距离，是交叉保护关键靶点。

抗原位点突变与单抗反应性

研究用Group 1和Group 2单克隆抗体做血凝抑制试验（HI 试验）：R118-A与Group 1单抗（2D6、2E4、3E6）结合更强，与Group 2单抗（1B10、5E5、4D7）结合减弱；R118-AB1E虽对Group 1单抗反应更强，但对Group 2识别下降更显著。故仅突变位点A，可使病毒抗原性“偏向”Group 1并保留部分Group 2识别能力，是平衡疫苗广谱保护的最佳选择。

无特定病原体鸡（SPF鸡）系列实验

图 4 H9N2禽流感病毒攻毒后第3、5、7天咽喉与泄殖腔拭子中的病毒排毒情况

HI抗体评估中，R118-A对两组毒株滴度高、保护覆盖全且个体一致，R118-AB1E则Group 2滴度低、保护不足；中和试验中，R118-A对两组毒株滴度均衡（Group 1：3.10-3.65 log₄，Group 2：5.67-5.92 log₄），交叉中和最优；攻毒实验中，R118-A组排毒少（W100318感染0/10排毒），R118组保护弱、PBS组全排毒。综上，R118-A广谱保护力强，对Group 1优势显著。

研究结论

R118-A的优势源于HA蛋白“A 位点”的改造，改3个关键氨基酸既扩大防护范围，又不影响原有防护效果，且不同鸡接种后免疫力稳定。团队还搭建了“改关键位点+精准筛选”的研发模板，为后续流感疫苗研发提供参考。

未来R118-A完善落地后，养殖户无需频繁换疫苗，能降低养殖风险与成本。

原文链接：https://doi.org/10.1016/j.jia.2025.08.018