腺病毒载体因安全性高、基因携带量大、能引发强免疫应答，已在疫苗和基因治疗中广泛应用。随着腺病毒载体在新冠疫苗、肿瘤治疗和罕见病基因治疗中的需求不断增加，如何以更低成本、更高纯度制备高滴度载体，成为产业化亟需解决的问题。

传统生产中常使用 HEK293 细胞表达腺病毒E1基因以补偿缺失区，但其基因组与腺病毒载体存在同源序列，可能发生同源重组，产生具复制能力的腺病毒（replication competent adenovirus，RCA）。RCA在大规模生产中属于监管重点，安全性风险限制了其临床应用。

为避免RCA污染，加拿大研究团队建立了一株来源于A549的补偿细胞系 SF-BMAdR-281，其仅表达腺病毒最小必需的E1A/E1B序列，与E1缺失载体无同源区域，可稳定生产RCA-free的腺病毒载体。最新研究针对该细胞系进一步开发高滴度培养工艺，为未来商业化生产提供可行方案。

研究首先评估了四种常用无血清培养基，发现Pro293s与HyCell的1:1混合体系能显著提高细胞密度，最高达4.2×10⁶ 个/mL，病毒滴度比传统工艺提升70%。相比之下，常见的补料分批（fed-batch）培养在该细胞系中的增产效果有限，提示其在病毒生产上不如在抗体生产中高效。

进一步的尝试显示，在感染前进行一次培养基更换，能同步提升细胞状态和营养供给，使病毒滴度进一步提升至2.6×10¹⁰ vp/mL。研究表明，病毒生产阶段的需求与细胞扩增阶段不同，单一培养基难以兼顾两者，通过在不同阶段合理切换培养基，可有效提升最终病毒产量。

为进一步突破细胞密度和代谢抑制的限制，研究团队建立了3 L一次性生物反应器连续灌流工艺。在该过程中，通过持续补入新鲜培养基并同步移除代谢废物，使细胞在感染时达到7.0×10⁶个/mL 的高密度，最终获得6.3×10¹⁰ vp/mL的腺病毒滴度，约为原有工艺的7.5倍。

该研究明确了影响腺病毒产量的关键因素，包括培养基组成、感染细胞密度、代谢抑制以及不同阶段的营养需求差异。相比传统工艺，混合培养基、感染前培养基更换和灌流技术可显著提升病毒滴度，为无RCA腺病毒的大规模生产提供了可选路径。

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参考来源：Shen CF, Burney E, Gilbert R, Tremblay S, Loignon M. Process development for high-titer production of adenovirus devoid of replication-competent particles in suspension-adapted complementing A549 cell culture. BMC Biotechnol. 2025 Nov 3;25(1):119. doi: 10.1186/s12896-025-01051-8.