研究背景

蚊媒病毒，如西尼罗河病毒（WNV）、登革热病毒（DENV）和日本脑炎病毒（JEV），在全球范围内对人类健康构成严重威胁。传统的疫苗生产依赖于贴壁培养的C6/36细胞系，这种方法不仅成本高，而且难以大规模生产。此外，使用动物血清的培养基存在成分不一致、蛋白质含量高以及潜在的污染风险。因此，开发一种高效、可扩展且符合良好生产规范（cGMP）的疫苗生产平台显得尤为重要。

研究方法

细胞系适应悬浮培养：将贴壁培养的C6/36细胞系逐步适应无血清悬浮培养，使用Sf900-III培养基。通过多次传代，细胞逐渐适应悬浮培养条件，最终实现高密度（高达2.5×10⁷细胞/mL）和高活力（98%以上）的稳定培养。

细胞冻存与复苏：使用含有20% DMSO的Sf900-III培养基进行细胞冻存。冷冻细胞在液氮中保存，复苏后直接进入悬浮培养，验证了细胞系的稳定性。

病毒感染与滴定：使用嵌合正正病毒（如BinJV/WNVKUN、BinJV/DENV2和BinJV/JEVNSW22）感染C6/36悬浮细胞。通过TCID50方法测定病毒滴度，评估不同培养基对病毒复制的影响。

培养基优化：比较了Sf900-III和CD-FortiCHO两种培养基对病毒复制的影响。发现CD-FortiCHO培养基（pH 7.5）显著提高了病毒滴度，而Sf900-III培养基（pH 6.2）则导致病毒滴度大幅下降。

病毒纯化与分析：使用PEG沉淀和梯度超速离心法纯化病毒。通过SDS-PAGE和透射电子显微镜（TEM）分析病毒的纯度和形态。

研究结果

细胞生长与活力：适应悬浮培养的C6/36细胞在Sf900-III培养基中表现出良好的生长和高活力（图1A）。在250rpm的摇床速度下，细胞未出现聚集现象，形态良好（图1C）。

病毒复制：在Sf900-III培养基中，BinJV/WNVKUN病毒滴度显著低于传统培养基（图2A）。

调整培养基pH至7.3后，病毒滴度显著提高，但沉淀问题限制了其实际应用（图2C）。使用CD-FortiCHO培养基时，病毒滴度显著提高，BinJV/WNVKUN在144小时后达到7.6×10⁹ IU/mL（图3B）。

病毒纯化与形态分析：纯化后的病毒颗粒在SDS-PAGE上显示出清晰的结构蛋白条带（图5A）。透射电子显微镜（TEM）显示病毒颗粒呈典型的球形，直径约50nm（图5B-D）。

结论与展望

近期，全球多地报告蚊媒病毒传播的病例增加，如登革热和西尼罗河病毒的爆发。这些病毒的传播不仅对公共卫生构成威胁，还对医疗资源和疫苗供应提出了巨大挑战。例如，2025年10月，东南亚部分地区报告了登革热病例的显著增加，导致医疗资源紧张。在这种背景下，这项研究的成果显得尤为重要，因为它为大规模生产高效疫苗提供了可能，有助于快速应对疫情爆发。此外，随着全球气候变化和城市化进程的加快，蚊媒病毒的传播范围可能会进一步扩大。因此，开发高效、可扩展的疫苗生产平台不仅是科学上的突破，更是公共卫生领域的重大进步。

这项研究为蚊媒病毒疫苗的生产提供了一种新的、高效的无血清悬浮培养方法。通过优化培养基和培养条件，研究团队成功实现了高密度细胞培养和高病毒滴度的生产。这一成果不仅降低了生产成本，还提高了疫苗的可及性，为应对全球蚊媒病毒传播的公共卫生挑战提供了有力支持。

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参考文献：https://doi.org/10.3390/v17020250