在空肠弯曲菌的侵袭性菌株中发现出一种直接感应的半乳糖化学感受器
原创 发布时间:2023-02-16 浏览次数: 1781 来源: 汪智

核心提示:在这里,作者使用聚糖和小分子阵列,以及表面等离振子共振等方法,揭示了Tlp11与半乳糖相互作用,并确定了其生物学功能。


  先前已在空肠弯曲杆菌(Campylobacter jejuni)的侵入性菌株中发现了一种罕见的趋化性受体Tlp11,在这里,作者使用聚糖和小分子阵列,以及表面等离振子共振等方法,揭示了Tlp11与半乳糖相互作用,并确定了其生物学功能。

  将Tlp11进行重组和纯化表达,使用氨基酸、聚糖和小分子阵列分析,发现能与末端为半乳糖的聚糖结合,结果如下表所示。并且用STD-NMR鉴定出半乳糖为Tlp11的唯一配体。我们将此受体命名为CcrG-半乳糖弯曲菌化学受体。


  对全长ccrG基因的BLAST分析显示,在编码该受体的所有菌株中,ccrG序列在核苷酸水平上具有95–98%的同一性。对Pfam 29和CDD 30域数据库进行基于序列的搜索,发现CcrG周质区域(残基32至332)中没有已知域。另外,当使用共同的氨基酸结构域作为查询序列时,没有一个含有CcrG的菌株具有与蛋白质摄取半乳糖或其他糖同源性的基因。


  图1 所选化学感受器的周质区域

  将ccrG敲除后,其自凝集性显著下降,且会显著影响到空肠弯曲菌对半乳糖的趋化性,但是不同的菌株表现不同,由此可见,对半乳糖的趋化性是依赖于CcrG的。


  图2 空肠弯曲菌的自凝聚和趋化性

  接着测定了CcrG对于空肠弯曲菌的生物学意义,包括粘附和入侵性实验。结果如下图所示,测试了三个不同的空肠弯曲菌,以及三个不同的细胞系。可以发现,对于菌株520突变株的粘附能力显著下降,在81116和FF34中敲入CcrG后,可以发现其粘附能力显著增加,由此可知,CcrG对于空肠弯曲菌粘附具有极其重要的作用。但是,敲除株和野生株其入侵能力无显著差异。


  图3粘附力和侵入分析

  为了进一步确认CcrG作为空肠弯曲菌 520中的化学感受器的作用,使用了酵母双杂交系统来分析CcrG的预测胞质信号传导域与趋化性信号传导途径的支架蛋白同源物之间的相互作用。结果如下表所示,发现它能与许多趋化性相关的蛋白相互作用,并且还能与自己作用,形成二聚体。


  结论:Tlp11是空肠弯曲杆菌对半乳糖的趋化反应所必需的,它是细菌中细胞外传感器的最丰富的家族。Tlp11信号域与趋化性支架蛋白CheV和CheW相互作用,并且能够与自己相互作用下形成二聚体。我们将其命名为CcrG。

  参考文献:Day C J, King R M ,Shewell L K , et al. A direct-sensing galactose chemoreceptor recently evolved in invasive strains of Campylobacter jejuni[J]. Nature Communications, 2016, 7:13206.

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