核心提示：菌种保藏是指通过适当的方法使微生物能长期存活，并保持原种的生物学性状稳定不变的一类措施。菌种保藏的具体方法很多，原理大同小异。
菌种保藏是指通过适当的方法使微生物能长期存活，并保持原种的生物学性状稳定不变的一类措施。菌种保藏机构的任务是在广泛收集实验室和生产用菌种、菌株、病毒毒株(有时还包括动、植物的细胞株和微生物质粒等)的基础上，将他们长期保藏、使之不死、不衰、不乱，以达到便于研究、交换和使用等目的。
菌种保藏的具体方法很多，原理大同小异。首先应挑选典型菌种或典型培养物的优良纯种，最好保藏它们的分生孢子、芽孢等休眠体;其次，还要创造一个有利于它们长期休眠的良好环境条件，诸如干燥、低温、缺氧、避光、缺乏营养以及添加保护剂或酸度中和剂等。干燥和低温是菌种保藏中最重要因素。据试验，微生物生长温度的低限约在-30℃，而酶促反应低限在-140℃，因此，低温必须与干燥结合，才具有良好保藏效果。在实践中，发现较低的温度更有利于保藏;细胞体积大小和细胞壁的有无对低温的反应不同，一般体积越大越敏感，无壁者比有壁者敏感，这是因为细胞内的水分在低温下会形成破坏细胞结构的冰晶。菌种冷冻保藏前后的降温与升温速度对不同生物影响不同。速冻可减少冰晶的产生，冷冻时的介质对细胞损伤与否关系极大，例如0.5 mol/L左右的甘油或二甲亚砜(DMSO)可透过细胞，并通过降低强烈的脱水作用而保护细胞;海藻糖、脱脂牛奶、血清白蛋白、糊精或聚乙烯吡咯烷酮(PVP)等均可通过与细胞表面结合的方式防止细胞膜的冻伤。
在微生物学实验室和生产实践中最常用的菌种保藏法见表1：
方法 | 主要措施 | 适宜菌种 | 保藏期 |
冰箱保藏法（斜面） | 低温（4℃） | 各大类 | 1~6月 |
冰箱保藏法（半固体） | 低温（4℃），避氧 | 细菌，酵母菌 | 6~12月 |
石蜡油封藏法1 | 低温（4℃），阻氧 | 各大类2 | 1~2年 |
甘油悬液保藏法 | 低温（-70℃），保护剂（15%~50%甘油） | 细菌，酵母菌 | 约10年 |
砂土保藏法 | 干燥，无营养 | 产孢子的微生物 | 1~10年 |
冷冻干燥保藏法 | 干燥，低温，无氧，有保护剂 | 各大类 | ＞5~15年 |
液氮超低温保藏法 | 超低温（-196℃），有保护剂 | 各大类 | ＞15年 |
注：1 用斜面或半固体穿刺培养物均可，一般置4℃。
2 对石油发酵微生物不适宜。
