近日，海南大学食品科学与工程学院刘星教授团队在《Journal of Agricultural and Food Chemistry》（中科院农林科学大类一区Top，IF=6.1）发表了题为“Lateral Flow Immunochromatographic Assay for Competitive Detection of Crustacean Allergen Tropomyosin Using Phage Displayed Shark Single-Domain Antibody”的封面文章。2021级硕士研究生焦苏佳为第一作者，刘星教授为唯一通讯作者。

食物过敏已经成为食品安全领域的一个重要问题，其中甲壳类动物原肌球蛋白（Tropomyosin, TM）是一种常见的过敏原蛋白，为了保障消费者的食品安全和生命健康，迫切需要快速且灵敏的方法用于筛查食品中TM。本研究采用生物淘选策略，从噬菌体展示鲨源单域抗体天然文库中成功分离出针对甲壳类动物TM的单域抗体（VNAR）。随后，利用金纳米颗粒标记噬菌体展示VNAR制备免疫探针，进而开发了一种快速检测食品中TM的胶体金免疫层析法（AuNPs@PSV-LFIA）。噬菌体展示鲨鱼VNAR的生产具有可复制性且成本低廉，因而使得该方法稳定且经济。此外，AuNPs@PSV探针的制备简单，无需对噬菌体或AuNPs表面进行额外的化学修饰。经过优化噬菌体添加量、T线喷涂浓度、探针添加量和检测时间等实验条件，AuNPs@PSV-LFIA在15分钟内实现了对TM的快速检测，其可视化检测限和仪器检测限分别为0.1μg/mL和0.02 μg/mL。此外，AuNPs@PSV-LFIA还具备良好的选择性、准确性和稳定性。这项工作表明，鲨源VNAR是一种非常有前景的生化分析试剂，并且AuNPs@PSV-LFIA是一种

可靠的工具，能够用于快速检测实际样品中的甲壳类动物过敏原TM。

图1. (A) 靶向TM的特异性VNAR筛选；(B) AuNPs@PSV免疫探针的制备；(C)AuNPs@PSV-LFIA原理图

图2.(A) SDS-PAGE和Western blot表征纯化后的TM；(B) 四轮生物淘选中噬菌体的富集情况；(C)phage-ELISA鉴定阳性克隆；(D)来自18个阳性噬菌体克隆的VNAR氨基酸序列比对；(E)间接竞争phage-ELISA分析阳性克隆灵敏度。

图3. (A)在0−100 μg/mL范围内检测TM标准品的试纸条图；(B) TM定量检测试纸条的标准曲线

原文链接：https://pubs.acs.org/doi/10.1021/acs.jafc.3c07569