利用噬菌体扩增结合环介导等温扩增快速检测生禽肉中的活肠炎沙门氏菌

沙门氏菌属是全球主要的食源性病原体之一，就欧洲而言，它是第二大最常报告的食源性病原体。2021 年，肠炎沙门氏菌占报告的人类感染病例的 54.6%，肠炎沙门氏菌主要导致人类患沙门氏菌病，而鸡蛋和肉类等家禽产品是食物链中这种病原体的主要来源。多年来，食物链中沙门氏菌的控制一直基于基于经典培养的方法。尽管这些方法很有用，但这些方法既漫长又费力。分子方法在过去几年中成为经典微生物学的快速可靠的替代方案，但是该方法的一个典型局限性是它们无法区分活的微生物和非活的微生物。

然而利用噬菌体进行检测恰巧可以克服这一缺陷，噬菌体专门感染和复制活细菌细胞，因此这种方法基于噬菌体的检测，噬菌体仅在存在目标细菌时繁殖，而不是检测细菌本身。而且这种检测噬菌体的方法也会提高了相同范围内该方法的灵敏度。

在该研究中，作者开发了一种新的肠炎链球菌检测方法，该方法允许在同一天 （8 h） 检测活细胞。该方法在加标鸡胸肉样品中进行了评估，并基于噬菌体扩增和 LAMP （PA-LAMP） 检测的组合。此外，还测试了两种检测策略，实时荧光和肉眼比色检测。

图1 使用 A）纯噬菌体 DNA 和 B）噬菌体用内溶素 （E）、衣壳 （C） 和内溶素和衣壳 （E + C） 引物在 BWP 中连续稀释的噬菌体测定 LAMP 测定的动态范围

图2 SYBR Green I PA-LAMP 比色法试管 a）在白光下和 b）在紫外光下观察。每个试管对应加标不同浓度沙门氏菌的样品，如下所示： 1）9 CFU/25 g ；2）2.3 CFU/25 g ；3）1 CFU/25 g 和冷应激 4）49 CFU/25 g ；5）55.5 CFU/25 g； 6）44 CFU/25 g ；7）阴性对照 8）阳性对照。

结论：在本研究中，成功开发了用于检测鸡胸肉中活肠炎链球菌的原理验证 PA-LAMP 测定法。在大约 8 小时内，包括样品预富集、DNA 提取和 LAMP，可以检测到 1.1 CFU/25 g 的食品样品。这使得该方法适用于当天检测。此外，视觉替代方案的开发允许该方法以最少的设备投资应用于 PoT。这对于家禽屠宰场特别友好，因为家禽屠宰场对鸡胴体中的沙门氏菌进行常规控制。总而言之，本文开发了一种新的、快速的、简单的、非技术要求高且经济的方法，可以在同一个工作日内检测出沙门氏菌，其结果与参考方法 （ISO 6579） 相当。。

参考来源：Lamas A, Santos SB, Prado M, Garrido-Maestu A. Phage amplification coupled with loop-mediated isothermal amplification (PA-LAMP) for same-day detection of viable Salmonella Enteritidis in raw poultry meat. Food Microbiol. 2023 Oct;115:104341. doi: 10.1016/j.fm.2023.104341. Epub 2023 Jul 11. PMID: 37567642.