金黄色葡萄球菌（Staphylococcus aureus）是医院和社区感染的主要病原体之一，其多重耐药性（如MRSA）给临床治疗带来严峻挑战。传统抗生素的滥用加速了耐药性发展，亟需开发新型抗菌策略。噬菌体溶菌酶（endolysin）作为一种裂解细菌细胞壁的酶，因其高特异性、低耐药风险和广谱活性备受关注。本研究旨在从噬菌体52中克隆并表达溶菌酶LysSA52，评估其对革兰氏阳性菌的抗菌活性及抗生物膜能力，探索其作为新型抗菌剂的潜力。

此研究提取噬菌体DNA从金黄色葡萄球菌噬菌体52中提取DNA，通过PCR扩增获得1446 bp的溶菌酶基因（lysSA52）。载体构建：将基因克隆至pET-SUMO表达载体，转化至大肠杆菌BL21（DE3）中诱导表达。蛋白纯化：利用镍亲和层析纯化带有SUMO标签的融合蛋白，SDS-PAGE验证分子量约为66 kDa。将纯化的LysSA52（0.5-1 mg/mL）滴加至覆盖目标菌的琼脂板，观察裂解圈。测试90株细菌，包括49株金黄色葡萄球菌（18株MRSA）、13株表皮葡萄球菌（S. epidermidis）、3株溶血葡萄球菌（S. haemolyticus）及其他革兰氏阳性菌（如肺炎链球菌、化脓链球菌、肠球菌等）

LysSA52对83株葡萄球菌中的74株（89%）具有裂解活性，包括所有测试的MRSA菌株。此外，其对肺炎链球菌、化脓链球菌、粪肠球菌、屎肠球菌和萎缩芽孢杆菌（B. atrophaeus）也表现出显著活性，但对李斯特菌（L. monocytogenes）、乳酸杆菌（L. plantarum）及革兰氏阴性菌（如大肠杆菌、沙门氏菌）无作用。0.50 mg/mL的LysSA52处理12小时后，可减少金黄色葡萄球菌和表皮葡萄球菌生物膜约60%。实验表明，该酶能有效穿透生物膜基质并破坏其结构。pH适应性：LysSA52在pH 8.0时活性最高，pH低于7.0时活性显著下降。热稳定性：30-50°C处理30分钟后活性保留85%以上，60°C以上活性急剧丧失。储存稳定性：4°C储存9周后活性未明显下降，室温下部分失活。通过SMART工具预测，LysSA52包含三个功能域：CHAP（催化结构域）、Ami-2（酰胺酶结构域）和SH3b（细胞壁结合结构域），这种多结构域组。与其他溶菌酶的对比LysSA52的广谱性与已报道的溶菌酶（如LysK、Cpl-1）类似，但其对MRSA和凝固酶阴性葡萄球菌的高效裂解能力尤为突出。此外，其对益生菌（如乳酸杆菌）无影响，降低了治疗中破坏正常菌群的风险。生物膜是慢性感染难以根治的主要原因。LysSA52能显著减少已形成的生物膜，为治疗导管相关感染或慢性伤口提供了新思路。

参考文献：

ABDURAHMAN MUJIB ABDULKADIR, DURUKAN İNCI, DINçER TUBA, et al. Staphylococcus aureus Bacteriophage 52 Endolysin Exhibits Anti-Biofilm and Broad Antibacterial Activity Against Gram-Positive Bacteria [J]. The Protein Journal, 2023, 42(5): 596-606.