中国科研团队成功开发猫冠状病毒快速检测新工具 助力宠物健康防护

猫冠状病毒（FCoV）包括猫肠道冠状病毒（FECV）和猫传染性腹膜炎病毒（FIPV），其中 FECV 主要感染猫胃肠道，引起轻度自限性胃肠道症状，而 FIPV 感染会导致严重的免疫介导性疾病 —— 猫传染性腹膜炎（FIP），该病进展迅速且死亡率极高。研究表明，FIP 的发生与 FECV 感染期间病毒基因组突变有关，因此诊断 FECV 是预防 FIP 的有效措施。

 近年来，随着宠物猫数量的增加（据 2023 年宠物白皮书数据，中国宠物猫数量已超 6500 万只），猫传染病的防治需求日益迫切。然而，当前 FCoV 的快速诊断手段有限，传统 RT-PCR 检测需专业设备，普通宠物医院难以普及，导致基层临床快速检测需求无法满足。

图1：展示 FIPV-DF-2-N 基因扩增产物、重组蛋白表达及纯化结果（SDS-PAGE 和 Western blot 分析）。

图2：验证小鼠阳性血清及单克隆抗体（2G7、3H5）对 FIPV-DF-2 病毒的免疫荧光反应特异性。

研究团队构建了 FIPV-DF-2 病毒 N 蛋白的重组质粒 pCold I-FIPV-DF-2-N，进行原核表达和纯化，并用该质粒免疫 BALB/c 小鼠，成功制备了两株高特异性且稳定的单克隆抗体 mAbs 2G7 和 mAb 3H5，其中 mAb 2G7 识别 N 蛋白上的氨基酸序列 18RGRSNSRGRKN28，mAb 3H5 识别氨基酸序列 295GDQVKVTLTHTYYLPKDDAKTSQFLEQID323。随后，团队利用双抗体夹心法成功开发了用于检测 FCoV 的胶体金免疫层析试纸条。

图 3：通过 Western blot 和免疫荧光（IFA）证实单克隆抗体（2G7、3H5）仅与 FIPV-DF-2 病毒反应，与其他猫病毒无交叉反应。

实验结果显示，该试纸条对重组 pCold I-FIPVDF-2-N 蛋白的检测限为 209.8 ng/mL；对 10 份经常规 PCR 检测为阳性的猫腹水样本进行检测，总体符合率为 70%；且与猫细小病毒、猫杯状病毒和猫疱疹病毒无交叉反应。该检测方法可实现现场快速检测，为宠物诊所、动物收容所等提供了便捷的检测手段。

 图 4：通过免疫荧光和 Western blot 确定单克隆抗体 2G7 和 3H5 的最小抗原表位序列分别为 18-28aa 和 295-323aa。

近年来，中国宠物猫数量逐年增加，2023 年已达 6500 万只以上，猫传染病的防治愈发重要。该研究开发的双抗体夹心胶体金免疫层析法可检测猫排出的 FECV，有效实施治疗、降低冠状病毒载量，进而预防 FECV 感染演变为 FIPV 的风险，具有简单、快速、特异性强的特点，比以往方法更适合现场病原体诊断。

研究还对单克隆抗体的抗原表位进行了分析，通过 MegAlign 软件和 WebLogo 在线工具，将单克隆抗体的抗原表位与 NCBI 数据库中公布的 45 株 FCoV 病毒的相应靶区进行比较，发现 mAb 2G7 识别的表位与病毒株序列的完全同源性为 97.78%，mAb 3H5 识别的表位与病毒株序列的完全同源性为 98.62%，表明这些单克隆抗体能够广泛有效地识别 FCoV，为其在实际应用中的稳定性和可靠性提供了有力支持。

图 5：胶体金试纸条的检测原理示意图、灵敏度（检测限 209.8 ng/mL）、特异性（无交叉反应）及临床样本检测结果。

在临床样本检测中，试纸条对 10 份猫腹水临床样本进行检测，7 份呈阳性反应，3 份呈阴性反应，PCR 验证结果显示所有 10 份腹水样本均为阳性，试纸条与 PCR 的阳性符合率为 70%，证实了试纸条结果的可靠性。虽然存在 30% 的不一致性，可能与试纸条制备工艺不成熟、检测条件不稳定、裂解液选择不当等因素有关，但相较于 PCR 操作复杂、耗时的缺点，胶体金免疫层析试纸条因简单、快速、高效，具有更大的应用潜力。

总之，该研究制备的胶体金免疫层析试纸条具有良好的应用潜力，未来将通过优化制备工艺、调整检测条件等进一步提升性能，为临床诊断和治疗提供更准确、高效的检测工具。

参考文献：Liu Z, Yang Y, Qi R, et al. A colloidal gold immunochromatographic test strip based on mAbs anti-N protein to detect feline coronavirus[J]. Microbiology Spectrum, 2025: e01830-24.