PstDV1作为引发对虾“发育不良综合征”的重要病毒，此前因缺乏体外培养体系，其感染机制难以通过图像直接观察。

印度科钦科技大学研究团队在《Microbial Pathogenesis》（2025年第199卷）发表的研究中，借助PmLyO-Sf9杂交细胞系，通过透射电镜、流式细胞术等技术获取关键图像证据，首次以可视化方式完整呈现短沟对虾细小病毒（PstDV1）的复制周期、入侵路径及对宿主细胞的影响，为对虾养殖业抗病毒研究提供直观且精准的科学依据。

图 1 电子显微照片显示PstDV1感染细胞在不同时间点的细胞病理变化

图1的电子显微镜图详细记录了病毒感染不同阶段的细胞形态变化：12小时时，细胞质内有包裹病毒的内体囊泡（图1A，标注Vsc）；病毒颗粒通过受体介导进入细胞（图1B，闭合箭头所示），核孔复合体附近有电子致密颗粒（图1C，方形标注）。4-5小时时，细胞核内出现病毒发生基质（VS，图1D、E方形标注），这是病毒复制的“核心工厂”，核内外均有包含病毒颗粒的包涵体（图1D、E菱形标注）。48小时后，细胞器解体，包涵体中嵌入大量病毒颗粒（图1G），单个包涵体与内部病毒粒子的细节（图1H，比例尺200μM）也清晰可见，证实病毒通过包涵体和细胞裂解双重途径释放。

图 2 PstDV1在PmLyO-Sf9细胞系中不同时间点的细胞内周期和释放周期

在病毒复制动力学方面，图2清晰展示了PstDV1的复制效率。病毒在细胞内的衣壳基因表达有三次峰值（分别在感染后4小时、12小时和72小时），这与病毒释放的两个高峰（感染后5小时达到100%感染性，21小时达到80%感染性）相呼应，体现了病毒“复制-释放-再感染”的快速循环，解释了病毒为何仅需4-5小时就能完成一轮复制。

病毒对宿主细胞周期的操控也得到了验证。流式细胞术分析显示，感染前只有8.1%的细胞处于S期（病毒复制的关键阶段），而感染4小时后，S期细胞占比升至32%。同时，G2/M期细胞从34.9%降至13.4%（3小时时），9小时时又回升至26.9%。这表明病毒先让细胞进入S期以支持复制，随后推动细胞分裂以扩大感染范围。这一动态变化通过流式细胞术的DNA含量分布曲线直观呈现，为“病毒操控细胞周期”的机制提供了量化证据。

图 3 不同时间点PstDV1感染的PmLyO-Sf9细胞的AO-EB染色

图3的AO-EB双染色图显示，感染3小时后细胞开始出现早期凋亡迹象，4-5小时达到高峰，大量细胞呈现亮绿色或黄绿色，与正常细胞形成对比，表明凋亡是病毒抑制宿主、促进自身释放的重要手段。

从分子层面看，Cyclin B在感染6小时后表达上调3.3倍，推动细胞进入S期；Cyclin A在48小时后表达增加16倍，维持细胞在适合病毒复制的状态；而有丝分裂检查点基因Bub3在感染细胞中几乎不表达，Cdc2表达稳定。这些基因表达变化与细胞周期阶段转换相匹配，与流式细胞术结果相互印证。

通讯作者I.S. Bright Singh指出，这些图像数据不仅直观验证了PstDV1的复制机制，还为抗病毒药物筛选提供了可视化评估标准。例如，通过观察药物对病毒发生基质和释放高峰的影响，可以快速判断药物的抑制效果。该研究为全球对虾病毒研究提供了宝贵的可视化参考资料。

原文链接：https://doi.org/10.1016/j.micpath.2024.107179