一、细胞系对狂犬病毒的易感性 

AGE1.CR 与 AGE1.CR.pIX 两种禽源悬浮细胞系对原本在 BHK-21 中传代的 PV 狂犬病毒株均表现高度易感，不需要任何预先驯化即可产生 10⁷–10⁸ FFU/mL 的滴度；其中 CR.pIX 由于额外表达腺病毒 pIX 基因，在热应激相关通路的持续激活下，复制峰值略高，且细胞存活曲线更平缓，适合后续工艺放大。

二、关键工艺窗口的定量优化 

感染复数：MOI 0.001 即可达到 6.8×10⁸ FFU/mL 的峰值，较 0.01 或 0.05 的常规用量降低 10–50 倍，显著节省毒种。 

细胞密度：在 2×10⁶ cells/mL 接种密度下，单位细胞产毒量最高（76 FFU/cell/day），兼顾滴度峰值与细胞比产率；过高密度（4×10⁶ cells/mL）虽将滴度推高至 9×10⁸ FFU/mL，但比产率下降，提示“细胞密度效应”仍须通过营养策略修正。 

培养基：专为禽源悬浮细胞设计的化学限定培养基 CD-U5（270 mOsm/kg）表现最优；以 DMEM 稀释后渗透压升高，比产率线性下降，75 % DMEM 条件下降幅达 75 %，证明低渗配方是维持高产毒活性的前提。 

生长因子：去除培养基中唯一蛋白成分 LONG R³-IGF（10 ng/mL）后，滴度与细胞生长曲线无明显差异，进一步压缩成本并降低监管风险。

三、7 L 生物反应器放大与收获策略 

在 7 L 搅拌罐内，采用批式、补料批式及灌注三种模式并行验证： 

批式：8 天运行，收获 2.5 L，滴度 2.3×10⁸ FFU/mL，效力 3.5 IU/mL，可折算 8 750 剂。 

灌注：13 天连续收获 8 次，累积 8 L，滴度稳定在 1.9–3.3×10⁸ FFU/mL，效力倍增至 7 IU/mL，理论剂量提升至 84 000 剂，较批式增长 9.6 倍。 

灌注模式在维持高活率、延缓滴度衰减方面优势显著，且无需额外佐剂即可通过 NIH 小鼠效力试验，符合 WHO 对兽用狂犬疫苗 ≥1 IU/剂的要求。

图1 PV狂犬病病毒株感染CR细胞（A）和CR.pIX细胞（B）后3天的免疫荧光染色

四、经济学与可及性意义 

全程无血清、无动物源蛋白，培养基成本显著低于传统含血清工艺； 

悬浮细胞易于在线监控，可直接套用微生物发酵放大逻辑，适配 20 L–200 L 工业规模； 

单次 7 L 灌注即可满足约 8–10 万只犬的年度免疫需求，为狂犬病高发、资源受限地区提供了可负担、可复制的技术路线。

来源：10.1186/s12896-022-00747-5