一、研究背景与问题

非洲猪瘟（African Swine Fever, ASF）是由ASFV引起的烈性传染病，家猪和野猪感染后死亡率可达100%，自2007年从格鲁吉亚传入欧亚大陆以来，已对全球养猪业造成巨大经济损失。目前尚无商业化疫苗可用，疫情控制主要依赖扑杀和生物安全措施。灭活疫苗、亚单位疫苗等前期尝试均未能诱导有效保护性免疫，而减毒活疫苗（Live Attenuated Vaccines, LAVs） 近期展现出潜力。

当前减毒活疫苗研发主要通过基因编辑删除毒力相关基因（如MGF360/505家族基因）实现，但此类基因缺失可能影响疫苗免疫原性或生产稳定性。韩国研究团队此前通过将一株高致病性韩国分离株（Paju1/19）适应Vero细胞，获得了一株名为VacIn3 P13的克隆毒株，其基因组含有12个非同义单核苷酸多态性（SNP）而无大片段缺失，其中MGF300-2R和MGF505-7R基因因提前终止密码子而蛋白截短，可能共同贡献了其减毒表型。 

二、研究方法：剂量分组与攻毒评估

1.疫苗毒株与细胞培养

VacIn3 P13源自Vero细胞适应化传代（第13代），经空斑纯化获得，能在Vero细胞和猪肺泡巨噬细胞（PAM）中高效复制（滴度达1.78×10⁷ TCID₅₀/mL）。

攻毒用毒株为高致病性亲本病毒Paju1/19（基因II型）。

2.动物实验设计

20头8周龄ASFV阴性长白猪分为4组（每组5头）：3组分别肌肉接种10²、10⁴、10⁶ TCID₅₀/头的VacIn3 P13；1组接种培养基作为Mock对照组。

接种后28天（dpv），所有猪以10² HAD₅₀剂量攻毒Paju1/19，继续观察21天（dpc）。

 3.检测指标

安全性：每日体温、临床症状评分、血液及口咽/直肠拭子qPCR检测病毒载量。

有效性：攻毒后存活率、病毒血症、组织病毒分布（qPCR及Sanger测序区分疫苗株与攻毒株）。

免疫应答：间接ELISA（检测p30/p22抗体）和竞争ELISA（检测p30抗体）。

病理学：剖检脏器（脾、肝、肺、肾、淋巴结）进行大体和组织病理学评分（0-3分）。

三、研究结果：安全有效，剂量依赖残留毒力

1.安全性良好，仅高剂量组出现一例死亡

所有免疫猪未出现ASF特异性临床症状（如皮肤出血、呼吸困难）。低剂量组（10² TCID₅₀）仅1例出现短暂发热和腹泻；中高剂量组发热现象稍多但均自行缓解（图1B-C）。病毒血症呈剂量依赖性：10⁶ TCID₅₀组4头猪出现病毒血症，持续至28 dpv；10² TCID₅₀组仅1头短暂病毒血症（图1D）。一例10⁶ TCID₅₀组猪于19 dpv死亡，尸检发现继发猪链球菌感染，可能与免疫抑制相关。

2.攻毒后完全保护，未免疫组全部死亡

所有免疫猪（15/15）存活至21 dpc，而Mock组5头均于10 dpc内死亡（图2A）。免疫组仅1头（10² TCID₅₀组）出现短暂发热和病毒血症（为攻毒株感染），但迅速恢复（图2B-D）。组织病毒检测显示：免疫组淋巴结（尤其腹股沟）有低剂量疫苗株残留（图2G，表1），但主要脏器无病理损伤。

3.病理损伤显著减轻

Mock组呈现典型ASF病变：脾脏充血肿大、淋巴结出血肿大、肾脏皮质出血坏死（图4）。免疫组大体和组织病理评分均显著低于Mock组（p<0.01）（图3A-B），仅淋巴结有轻度出血（图5C），无淋巴细胞溶解或坏死。

4.有效诱导体液免疫应答

所有免疫猪在14 dpv后抗体转阳（ELISA阈值以上），且应答水平与剂量无关（图6）。Mock组攻毒前无抗体，攻毒后仅1头在6 dpc短暂阳性。

四、结论与展望：非GMO疫苗候选株的潜力与优化方向

1.结论：

VacIn3 P13作为通过细胞适应而非基因编辑获得的减毒株，避免了GMO争议，且具备以下优势：

安全有效：低剂量（10² TCID₅₀）即可提供完全攻毒保护，且妊娠母猪初步试验未见不良反应；

生产优势：适应Vero细胞，利于大规模量产；

免疫诱导：稳定诱导抗体反应，且病理损伤轻微。

但研究也发现高剂量组存在残留毒力（病毒血症延长、继发感染风险），提示需进一步优化。2.未来方向包括：

确定最佳免疫剂量（10² TCID₅₀已足够）；解析12个SNP（尤其MGF300-2R/MGF505-7R截短）在毒力减弱中的协同机制；评估对异源毒株的保护广度及野外应用可行性。

该疫苗候选株为ASF防控提供了新的非基因缺失型减毒活疫苗思路，有望在进一步安全性提升后进入临床应用评估。

参考来源:

Suh, Tae-Young et al. “Safety and efficacy of a Vero-adapted live attenuated vaccine candidate for African swine fever.” Vaccine vol. 56 (2025): 127172. doi:10.1016/j.vaccine.2025.127172