猪蓝耳病“死灰复燃”？12年后疫苗变异株惊现云南

猪蓝耳病病毒（PRRSV）是全球养猪业的“心腹大患”，具有高传染性和强基因变异特性，曾多次引发大规模疫情。2006年高致病性猪蓝耳病（HP-PRRSV）在中国暴发，影响200万头猪，死亡40万头。

为防控疫情，以JXA1-R为代表的高致病性猪蓝耳病弱毒活疫苗（MLV）被广泛应用，这类疫苗虽对同源病毒保护效果突出，但因仍能感染宿主并在靶细胞内复制，存在病毒重组和毒力返强的风险。2012年，江苏分离出3株返强毒株（NT1、NT2、NT3），引发严重疫情。此后12年，相关毒株未再引发大规模疫情。

此次云南疫情中，研究人员按流程将发病猪血清接种至MARC-145细胞（ATCC，CRL-12231），成功分离出致病病毒YNdl24。如图1A，该病毒感染细胞48小时后，细胞出现聚集、收缩并脱落的典型病变（CPE），这是PRRSV感染的特征；为确认毒株，研究用抗PRRSV N单克隆抗体做IFA试验，图1B显示感染组细胞有特异性荧光，对照组无，证实YNdl24是PRRSV。此外，病毒传至第3代时，经Reed-Muench法测定滴度达10⁷ TCID₅₀/mL，为后续实验奠基。

图 1 YNdl24的分离与鉴定 

为解析YNdl24的进化关系，研究团队基于PRRSV ORF5基因和全基因组构建系统发育树。图1C、1D均用MEGA12软件（12.0.4版本）的最大似然法（Kimura 2-参数模型，Bootstrap值500）构建，结果显示YNdl24属北美型PRRSV（PRRSV-2）第8谱系，与JXA1疫苗株传代株JXA1 P80同分支，体现其与该疫苗株的紧密进化关联；同时用Simplot软件（3.5.1版本）做重组分析（图1E），未检测到PRRSV-2谱系内重组信号，证实YNdl24是未重组的高致病性PRRSV毒株。

图 2 YNdl24的序列分析

研究团队还深入分析YNdl24的序列特征：图2A用Geneious Prime软件（2024.0.5版本）分析其Nsp2缺失模式，发现该毒株与JXA1-R疫苗衍生株有一致的不连续缺失特征；图2B以PRRSV VR-2332为参考，对比ORF1a、ORF1b、ORF4部分氨基酸序列，红色方框标注出YNdl24与JXA1-R衍生株共有的10个独特氨基酸突变位点，这些是确认其疫苗返强来源的关键；图2C用Malign软件（11.1.0版本）计算YNdl24与2012年JXA1-R疫苗返强毒株NT1、NT2、NT3的序列距离，显示三者核苷酸相似度达99.4%-99.5%，进一步证明其与12年前返强毒株高度同源。

此次研究借助系列图片呈现的实验数据，不仅明确了YNdl24毒株的身份、所属谱系及来源，更揭露了高致病性猪繁殖与呼吸综合征病毒（PRRSV）弱毒活疫苗（MLV）的固有缺陷。具体而言，该研究一方面证实高致病性猪蓝耳病弱毒活疫苗（如JXA1-R）的毒力返强风险存在长期潜伏性，为养猪业敲响疫苗安全警钟；另一方面发现YNdl24与2012年的疫苗返强毒株共享10个关键氨基酸突变位点，且二者核苷酸相似度超99.4%，为探寻病毒毒力返强的关键位点提供了明确靶点；同时，研究还指出现有疫苗的不足，可推动养殖行业优化疫苗应用策略、强化相关毒株监测，并倒逼更安全的新型疫苗研发。

原文链接：10.1128/spectrum.00728-25