幽门螺杆菌全球“半覆盖”：疫苗需求迫在眉睫

幽门螺杆菌（H. pylori）感染全球近50%人口，与慢性胃炎、胃溃疡及胃淋巴瘤密切相关。随着抗生素耐药率飙升，传统三联疗法根除率已降至70%以下。H. pylori通过表面脲酶分解尿素产氨，中和胃酸以定植胃上皮，其中UreE亚基对维持脲酶活性至关重要，且序列在菌株间高度保守，成为理想广谱疫苗靶点。

“pDNA-UreE”设计思路与制备工艺

研究团队通过化学合成将UreE基因克隆至真核表达载体pIRES2-DsRed-Express，获得质粒pDNA-UreE。生物信息学预测显示UreE具有184个氨基酸，分子量19.5 kDa，亲水性GRAVY值-0.308，抗原性评分0.565，稳定性指数25.64，表明其适合作为疫苗抗原。随后转化大肠杆菌TOP10扩增，提取质粒浓度达483 ng/μL，经PCR及双酶切验证无误。

图1. 流程图概述：发现高免疫原性分泌UreE蛋白并验证其疫苗构建体的免疫原性。

动物试验：三剂程序诱导87.5%保护率

动物试验显示，6–8周龄BALB/c雌鼠经三剂肌注100 μg pDNA-UreE后，以10^8 CFU/mL H. pylori SS1攻毒4周评估，胃组织菌量降至2.45 log10 CFU/g，黏膜炎症显著减轻，保护率高达87.5%，优于rUreE组（P < 0.05）；该DNA疫苗同时诱导Th1/Th2/Th17混合免疫（IFN-γ、IL-4、IL-17分别升2.8、2.9、2.3倍），接种小鼠IgG可剂量依赖地中和脲酶、阻断细菌黏附，且无插入突变风险，表达持续，具备长效安全优势。

动物试验：两剂程序即显优势

在攻毒保护试验中，11只2–3月龄健康猫按0、21天两剂程序分别接种“喵旺达”、市售疫苗或PBS，并于第35天用高滴度FPV、FCV、FHV-1攻毒。“喵旺达”组攻毒后体温正常、无明显临床症状，而病毒对照和市售疫苗组均出现高热、口腔溃疡及眼鼻分泌物；二免后“喵旺达”诱导的FPV、FCV、FHV-1中和抗体几何平均滴度分别达1:12 642、1:726、1:146，显著优于市售疫苗。FPV攻毒第6天，“喵旺达”组粪便核酸全部转阴，白细胞计数保持正常，市售组仍排毒；病理学显示“喵旺达”组肠道、呼吸道及眼睑无病变，市售组和对照组均见明显坏死与炎性浸润，证实两剂“喵旺达”即可提供快速、全面保护。

关键发现

1.三剂pDNA-UreE在攻毒后实现87.5%保护率，胃细菌负荷降至2.45 log10 CFU/g，黏膜炎症显著减轻。

2.疫苗同时激活Th1（IFN-γ↑2.8倍）、Th2（IL-4↑2.9倍）和Th17（IL-17↑2.3倍）通路，突破自然感染单一Th1型格局。

3.接种鼠IgG可剂量依赖性抑制幽门螺杆菌脲酶活性，阻断其黏附胃上皮。

4.DNA疫苗无插入突变风险，肌注后持续表达，具备长期免疫潜力。

未来展望与应用潜力

研究团队计划进一步优化递送系统（如纳米颗粒包裹）以增强黏膜靶向性，并开展大动物及临床前安全性评估。鉴于UreE的高度保守性，该策略有望覆盖不同地区H. pylori流行株，并与其他亚基（如UreB、CagA）联用开发多价疫苗。此外，DNA疫苗的低成本、易储存特性使其在资源有限地区推广更具优势，或将重塑全球幽门螺杆菌防控格局。

参考来源：

Nikzad-Chaleshtori M, Asgari M, Rezaeizadeh G, et al. The urease E subunit vaccine stimulate the immune response versus Helicobacter pylori in animal model[J]. Immunologic Research, 2025, 73(1): 74.