以昆虫专一性 Binjari 病毒（BinJV）为骨架构建的嵌合正黄病毒疫苗（BinJV/WNVKUN、BinJV/JEVNSW22、BinJV/DENV2）已在蚊细胞中证明安全有效，但传统贴壁培养需胎牛血清（FBS），放大困难、成本高且存在污染风险，无法满足人用疫苗的 GMP 需求。

昆士兰大学团队在《Viruses》发文，系统建立了无血清悬浮培养 C6/36（Aedes albopictus）蚊细胞的完整工艺，并首次实现高滴度嵌合正黄病毒疫苗的可放大生产：

1.细胞适应与工艺

（1）以 Sf900-III 无血清培养基为起始，经 47 天梯度驯化，C6/36 细胞成功转入悬浮培养，摇床 250 rpm 可防止聚集，倍增时间 44 h，峰值密度达 2.5×10⁷ cells/mL，可冻存-复苏并长期稳定传代（>100 代）。

（2）最佳传代参数：起始密度 5×10⁶ cells/mL，1:4 分传，每 7 天一次，可维持 98 % 以上活性。

2.病毒产量与介质优化

（1）在酸性 Sf900-III（pH 6.2）中，三种嵌合病毒滴度仅 10⁵ IU/mL 以下；

（2）利用“Sf900-III 驯化 → CD-FortiCHO 介质交换”策略（1:4 稀释即时感染），病毒滴度提升 4–5 个数量级：

– BinJV/WNVKUN 峰值 7.6×10⁹ IU/mL（144 h）；

– BinJV/JEVNSW22 峰值 1.7×10⁸ IU/mL；

– BinJV/DENV2 峰值 1.7×10⁷ IU/mL。

（3）证实 pH≥7.5 是维持病毒结构完整性和感染力的关键；CD-FortiCHO 虽不能完全支持细胞长期生长，但 6–7 天窗口足够完成一次高滴度收获。

3.产品纯度与形态

经 PEG-沉淀 + 蔗糖/酒石酸密度梯度纯化，SDS-PAGE 与负染 TEM 均显示典型 50 nm 球形病毒颗粒，结构完整，无血清蛋白污染。

该工艺将传统贴壁产量提升 1–4 个数量级，且无需血清与微载体，可直接放大至搅拌罐或一次性生物反应器，预计可将单剂疫苗成本降低 30–50 %。团队正与 ATCC 合作验证标准化 C6/36 细胞库，并计划进一步开发 pH 7.5 的昆虫细胞专用无血清培养基，实现“同一介质培养+感染”连续工艺，为登革热、日本脑炎、西尼罗河等虫媒病毒疫苗的全球可及性提供技术平台。

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参考文献：

Dawurung J.S. et al. Serum-Free Suspension Culture of the Aedes albopictus C6/36 Cell Line for Chimeric Orthoflavivirus Vaccine Production. Viruses 2025, 17, 250. https://doi.org/10.3390/v17020250