两株烈性奇异变形杆菌噬菌体的表征及其鸡尾酒在生鸡肉安全中的应用

两株烈性奇异变形杆菌噬菌体的表征及其鸡尾酒在生鸡肉安全中的应用

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来源:黄桥栏
2025-09-12 15:28:21
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核心提示:分离并鉴定两株烈性、安全的P. mirabilis噬菌体P14和Pp2,噬菌体鸡尾酒在体外和鸡肉中的杀菌效果均优于单一噬菌体。

奇异变形杆菌 (Proteus mirabilis)是一种重要的机会性病原体,可引起尿路感染(UTIs)、伤口感染等,是家禽产品中常见的污染菌,与食品腐败和潜在食品安全风险相关。抗生素耐药性(AMR)菌株的出现,使其治疗和控制变得困难。噬菌体疗法利用了噬菌体特异性感染并裂解细菌,具有高度特异性、自我复制、可有效对付耐药菌、环境友好的特性。在食品安全领域(如生物防腐剂),可有效减少食源性病原体,目前迫切需要针对食物源P. mirabilis的有效控制方法。本研究分离并鉴定两株烈性奇异变形杆菌噬菌体,评估其单独及混合(鸡尾酒)使用在生鸡肉中的抗菌效果。噬菌体鸡尾酒可迅速消除鸡肉表面的奇异变形杆菌,并且鸡尾酒处理比单一噬菌体提供了更长的抗菌效果。噬菌体P14 Pp2 表现出食品工业应用的理想性状,两种噬菌体都缺乏毒力基因,确保了食品安全。

1、噬菌体分离与宿主范围

从污水中分离到20株噬菌体,选出P14Pp2进行后续研究,其中P14可裂解15/24Pm + 3沙门氏菌Pp2可裂解12/24Pm + 1株沙门氏菌,鸡尾酒(P14+Pp2可裂解20/24Pm + 3株沙门氏菌。

2、形态学与基因组分析

P14具有二十面体头部(56 nm),长尾(133 nm),属Jerseyvirus

Pp2具有变形二十面体头部(130×90 nm),收缩尾,属GelderlandvirusT4-like)。P14基因组特征:43,158 bpGC 49.57%64 ORFs,无tRNAPp2基因组特征:158,394 bpGC 36.97%254 ORFs,含11tRNA,均无无毒力基因、无耐药基因、无溶原相关基因。

1:噬菌体phiEaSP1吸附曲线及一步生长曲线

3、生物学特性

P14 Pp2MOI(最佳感染复数) 均为0.01。一步生长曲线显示,P14的潜伏期10 min,爆发量为68 PFU/细胞;Pp2的潜伏期30 min,爆发量39 PFU/细胞。其生物学特性显示,在pH 3–9P14)、3–8Pp2)稳定,在4–37°C稳定,50–60°C活性下降,70–80°C失活。

2 一步生长曲线 + pH/温度稳定性曲线

4、体外裂解能力

单一噬菌体可在MOI=100时可抑制细菌生长4–6小时,而P14 Pp2鸡尾酒的抑制时间可延长至8–10小时,效果更持久。

3 体外裂解曲线对比

5、鸡肉中杀菌效果

4°C条件下,在MOI=1100时,未实现完全根除,但细菌去除率超过99%MOI=10,000时,P14可在8小时完全清除PM14Pp2可在2小时清除99.9% PMp2P14Pp2鸡尾酒可在1小时清除PM146小时完全清除PMp2,并且噬菌体滴度在整个过程中保持稳定。

4:鸡肉中菌落数变化曲线 

结论:成功分离并鉴定两株烈性、安全的P. mirabilis噬菌体P14Pp2,噬菌体鸡尾酒在体外和鸡肉中均表现出优于单一噬菌体的杀菌效果,在4下可快速清除鸡肉表面的P. mirabilis,具备实际应用潜力,为替代抗生素控制食品中病原菌提供了新策略。

参考来源:10.1016/j.fm.2025.104919

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