本研究以从鸡源分离的24 株致病性奇异变形杆菌（P. mirabilis） 为宿主菌，从污水和粪便样本中分离鉴定出两株烈性噬菌体ABTNL-P14（P14） 和ABTNL-Pp2（Pp2），经基因组分析确认二者无毒力因子、溶原相关基因及抗生素耐药基因，符合食品应用安全标准；通过生物学特性研究发现，P14 和 Pp2 的最佳感染复数（OMOI）均为 0.01，潜伏周期分别为 10 分钟和 30 分钟，在 4-37℃、pH 3-9 范围内稳定性良好；体外裂解实验显示，二者组成的噬菌体鸡尾酒对 P. mirabilis 的裂解谱更广（覆盖 83.3% 的 P. mirabilis 菌株），抑菌时长显著延长；在 4℃条件下，该鸡尾酒对生鸡胸肉表面的 P. mirabilis 清除效果显著，高感染复数（MOI=10,000）时 1 小时内可完全清除宿主菌株 PM14，6 小时内清除 PMp2，为食品中 P. mirabilis 的绿色生物防控提供了有效策略。

奇异变形杆菌（P. mirabilis）的危害：

致病性：属于摩根氏菌科变形杆菌属，为机会致病菌，可通过分泌脲酶、溶血素、金属蛋白酶等毒力因子，引发人 / 动物的胃肠道感染（腹泻）、泌尿道感染（尿道炎），严重时可致败血症，病死率达 20%-50%。

食品污染风险：近年来 P. mirabilis 引发的食源性疾病 incidence 上升，研究显示市售生鸡肉中其检出率高达54.39%（Ma et al., 2022），且鸡源菌株与临床人源菌株耐药谱高度相似，提示食品传播风险。

耐药危机：鸡场分离的 P. mirabilis 对多种抗生素耐药，本研究中 24 株鸡源菌株对氟苯尼考、红霉素、阿莫西林、左氧氟沙星的耐药率达 100%，对阿奇霉素、阿米卡星耐药率超 95%，传统抗生素防控失效，亟需替代方案。

噬菌体作为替代策略的优势：

噬菌体是专一裂解细菌的病毒，具有无生物残留、不破坏肠道共生菌、不诱导细菌耐药等特性，被视为食品领域绿色生物杀菌剂的理想选择。此前研究已证实噬菌体对沙门氏菌、大肠杆菌等食源菌的防控效果，但针对 P. mirabilis 的研究较少，本研究填补了这一空白。

主要工作：

1、分离鉴定两株烈性噬菌体，验证其安全性

噬菌体分离与筛选：以从辽宁不同鸡场分离的 24 株致病性 P. mirabilis（含 PM14、PMp2 等）为宿主菌，从海城、大连的污水及粪便样本中分离纯化出 2 株具有良好生物学特性的烈性噬菌体，命名为 ABTNL-P14（P14）和 ABTNL-Pp2（Pp2）。

形态与分类鉴定：通过透射电镜观察，明确 P14 为 Guernseyvirinae 亚科 Jerseyvirus 属（正二十面体头部 56nm + 非收缩长尾 133nm），Pp2 为 Tevenvirinae 亚科 Gelderlandvirus 属（变形二十面体头部 130×90nm + 收缩尾鞘 60×21nm）；结合末端酶大亚基构建系统发育树，进一步确认分类归属。

基因组安全验证：对两株噬菌体进行全基因组测序（P14 登录号 PQ766629，Pp2 登录号 PQ821890），分析显示二者均无毒力因子基因、抗生素耐药基因及溶原相关基因，仅含 DNA 包装复制、宿主裂解（如 holin-lysozyme 系统）、结构蛋白相关 ORF（P14 64 个 ORF，Pp2 254 个 ORF），符合食品应用安全标准。

2、系统分析噬菌体生物学特性，评估其应用适配性

关键生长参数测定：通过最佳感染复数（OMOI）实验，确定 P14 和 Pp2 的 OMOI 均为 0.01（低剂量即可高效增殖，降低生产成本）；通过一步生长曲线，测得 P14 潜伏周期 10 分钟、爆发周期 40 分钟、爆发量 68 PFU/cell，Pp2 潜伏周期 30 分钟、爆发周期 40 分钟、爆发量 39 PFU/cell，短潜伏周期利于快速控菌。

环境稳定性测试：验证两株噬菌体在 4-37℃（模拟食品储存与生理温度）、pH 3-9（适配多数食品 pH，如鸡肉 pH 约 6）范围内效价稳定；50-60℃处理 60 分钟效价仅降 1 个数量级，P14 在 70℃仍保留 10⁷ PFU/mL 效价，适配食品加工与储存环境161720。

裂解谱测定：通过斑点试验，发现 P14 可裂解 62.5%（15/24）的 P. mirabilis 菌株及 3 株沙门氏菌，Pp2 可裂解 50%（12/24）的 P. mirabilis 菌株及 1 株沙门氏菌，为后续鸡尾酒构建奠定基础。

3、构建噬菌体鸡尾酒，验证其在生鸡肉中的防控效果

鸡尾酒体外抑菌验证：将 P14 与 Pp2 按等比例混合构建鸡尾酒，其裂解谱拓宽至 83.3%（20/24）的 P. mirabilis 菌株；体外抑菌实验显示，MOI=100 时对 PM14 抑菌 8 小时、对 PMp2 抑菌 10 小时，抑菌时长比单噬菌体延长 2-4 小时，且细菌复壮延迟。

生鸡胸肉表面清除实验：在 4℃冷藏条件下（模拟食品储存），对接种 P. mirabilis 的生鸡胸肉喷洒不同 MOI 的鸡尾酒，结果显示：MOI=10,000 时，1 小时内完全清除宿主菌株 PM14，6 小时内完全清除 PMp2，清除率超 99.9%；实验全程噬菌体效价稳定，证明其可高效防控生鸡肉中 P. mirabilis 污染，为食品工业应用提供直接证据。

参考文献：

ZHANG, Shilin, et al. Characterization of two virulent Proteus mirabilis phages and application of phage cocktail in raw chicken safety. Food Microbiology, 2025, 104919.