一、研究背景与意义

传染性法氏囊病（IBD）被业界称为“鸡艾滋病”，其超强毒株（vvIBDV）可使雏鸡死亡率>30%，更严重的是破坏法氏囊B细胞前体，导致长达6周的免疫抑制，令新城疫、禽流感等常规疫苗随之失效。VP2是IBDV唯一能够诱导中和抗体的结构蛋白，因此VP2 DNA疫苗成为研究热点；但裸露质粒在禽类体内转染效率低、免疫原性弱，亟需安全、低成本且适合现场的分子佐剂。IL-17是Th17细胞的核心效应因子，在哺乳动物中已证明可募集中性粒细胞、增强黏膜免疫，然而在家禽疫苗领域尚属空白。本研究首次把“鸡IL-17（chIL-17）”写进DNA疫苗佐剂字典，回答其能否提高抗体、能否激活细胞免疫、能否真正降低死亡三个关键问题，为实现“一针多效、常温储运”的禽用疫苗升级提供新工具。

二、研究方法简述

1.基因构建：RT-PCR克隆chIL-17（510 bp），构建pcDNA-chIL-17与已报道的pcDNA-VP₂₃₆₆（含52-417 aa抗原表位）真核表达质粒。

2.体内表达验证：HEK293T细胞转染+Western blot检测分泌型IL-17；肌肉注射SPF鸡后RT-PCR追踪质粒表达至35 d。

3.免疫与攻毒：256只21日龄SPF鸡随机8组，联用组VP₂₃₆₆（100 μg）±chIL-17（50/100/200 μg）两针免疫（间隔7 d）；35 d经口攻毒10³ ELD₅₀ vvIBDV，观察8 d记录死亡、剖检法氏囊及鼻拭子病毒载量。

4.免疫指标：ELISA测IBDV特异性及中和抗体；MTT法测脾淋巴细胞增殖；ELISA测IFN-γ/IL-4；TCID₅₀测组织病毒滴度。

三、研究结果与分析

1.质粒构建与表达——Fig.2与Fig.3给出“能表达、能分泌”铁证

图2A显示RT-PCR获得510 bp IL-17条带；双酶切后得到预期片段（图2B），测序仅信号肽区出现2个同义突变，不影响功能。Western blot（图3）在细胞上清与裂解液均检出约26 kDa条带，证明chIL-17可在真核系统分泌表达，为后续体内“自我佐剂”奠定基础。

2.体内持续表达——Fig.4展示“质粒至少存活4周”

肌肉注射后1-35 d均可RT-PCR检出IL-17与VP₂₃₆₆转录本（图4），表达高峰在第8-14 d，与抗体上升期同步；空载体组阴性，排除污染假阳性。

3.体液免疫被显著放大——Fig.5A-B

ELISA（图5A）显示：单用VP₂₃₆₆组42 d抗体滴度约1:800；加入100 μg chIL-17后升至1:3200，与弱毒疫苗组持平（P＜0.01＝。中和实验（图5B）呈现剂量依赖——200 μg IL-17组中和滴度达1:128，比单用VP₂组提高4倍，提示IL-17可“撬开”鸡只Th1-B细胞协同，显著提升功能性抗体。

4.细胞免疫同步增强——Fig.6和Fig.7给出证据

MTT增殖指数：200 μg IL-17组刺激指数（SI）=2.5，是单用VP₂组（1.4）的1.8倍（图6）。IFN-γ水平随IL-17剂量递增，最高达(250±20) pg/mL（图7A），而IL-4无显著差异（图7B），表明chIL-17选择性驱动Th1通路，与禽类抗病毒需求高度匹配。

5.攻毒保护——Table 2给出“生死数据”

单用VP₂组死亡率44%，保护率仅56%；加100 μg IL-17后死亡降至19%，保护率81%；200 μg组死亡13%，保护率87%，与弱毒疫苗组（100%）差距缩小至13%。

法氏囊病毒载量：200 μg IL-17组TCID₅₀降至1.86×10¹/g，比单用VP₂组（1.65×10⁴/g）下降3个log；鼻分泌病毒同步下降，证明IL-17不仅减少死亡，更显著降低排毒，有利于场内生物安全。

四、研究结论

首次证实chIL-17是安全、高效的禽用DNA疫苗分子佐剂，可剂量依赖性提升VP₂疫苗的体液-细胞双重免疫；机制层面通过增强IFN-γ分泌与淋巴细胞增殖，驱动Th1偏向，显著降低法氏囊病毒载量和临床死亡；200 μg chIL-17+100 μg VP₂组合保护率87%，已接近商品弱毒苗水平，但无需冷链、无活毒返强风险，适合孵化场一次性肌注免疫。

参考来源：https://doi.org/10.1016/j.psj.2025.105247