反向遗传学赋能！巴西新型重组疫苗为猪流感防控开辟新路径

研究背景

猪流感病毒（SIAV）是全球养猪业的重要威胁，巴西猪群中目前流通着pH1N1、人源季节性H3N2、H1N1等多个谱系，其中huH1谱系检出率持续上升。现有疫苗难以覆盖多变的病毒株，且更新速度滞后，导致防控难度加大。因此，开发可快速迭代、针对性强的新型疫苗，成为巴西猪流感防控的迫切需求。

关键突破

重组疫苗精准构建，序列稳定性获验证

研究团队通过反向遗传学技术，将野生huH1N1病毒的HA和NA基因片段与A/Puerto Rico/8/1934（H1N1）病毒的其余六个片段重组，在MDCK细胞中扩增获得工作毒株（图1），滴度达3.6×10⁷TCID50/mL。

序列分析显示，重组病毒与2013年原始毒株及2019年流行毒株的HA基因相似性达99.8%-99.9%，NA基因相似性95.6%-100%，无明显核苷酸变异（表1）。

双佐剂配方协同发力，中和抗体水平显著提升

疫苗经紫外线灭活后，分别搭配OW佐剂和GP佐剂制成两种配方，每剂量含128血凝素（HA）单位。小鼠经两次肌内免疫后，OW疫苗组和GP疫苗组均实现血清阳转，其中OW疫苗组的血凝抑制（HAI）滴度与活病毒鼻内免疫组相当，且显著高于GP疫苗组，未检测到针对pH1N1和H3N2的交叉抗体，免疫特异性强（图4）。

攻毒试验验证保护效力，体重与生存状况稳定

加强免疫3周后，小鼠经鼻内接种1×10⁶PFU的野生huH1N1病毒进行攻毒。结果显示（图5、图6、表3），接种两种重组疫苗的小鼠均无显著体重下降，而对照组（仅含佐剂或PBS）在攻毒后5-7天体重降幅明显，直至第10天才逐步恢复。疫苗组与对照组的体重差异在攻毒后5-9天达统计学显著水平，且两组疫苗的保护效果无明显差异。

肺部病毒载量降低，病理损伤得到有效控制

攻毒后4天采集支气管肺泡灌洗液（BALF）和肺组织进行检测，疫苗组的病毒Ct值显著高于对照组，病毒滴度（log10 TCID50 eq/mL）显著降低，活病毒组和阴性对照组未检出病毒。免疫组化（IHC）分析显示，疫苗组、活病毒组及阴性对照组的肺组织均无病毒抗原标记，而对照组肺组织出现多灶性或局灶性阳性染色，主要集中在细支气管和支气管上皮细胞（图 7、图 8）。

结论与展望

本研究成功利用反向遗传学技术开发出针对巴西流行huH1N1猪流感病毒的重组灭活疫苗，两种佐剂配方均能诱导高效特异性免疫应答，在小鼠模型中实现对病毒感染的有效保护，且疫苗生产周期短、序列稳定性高，解决了传统疫苗更新滞后的痛点。该技术为巴西猪流感防控提供了灵活高效的新工具，尤其适用于应对病毒快速变异的需求。未来研究将聚焦多价重组疫苗的开发，覆盖巴西猪群中流通的多种SIAV毒株，并在目标物种猪身上开展更全面的免疫应答分析，结合抗原图谱筛选最优疫苗株，推动疫苗的商业化应用，为养猪业筑牢疫病防控屏障。

参考文献：

Fraiha A L S, Santos B S A d S, Aguilar N R, et al. Immunization and challenge trials in a murine model using different inactivated recombinant vaccines against H1N1 swine influenza virus circulating in Brazil. Vaccine 45 (2025) 126638.