流感病毒变 “疫苗载体”？牛结核防控玩出新花样

牛结核病（bTB）由牛分枝杆菌引发，可通过污染牛奶或气溶胶传播给人类，是全球公认的重大人畜共患病。据试验模型显示，未免疫动物感染后肺部会出现大量坏死灶与肉芽肿，细菌载量高达5.8 lg CFU，而现有卡介苗（BCG）虽能降低发病风险，却存在明显缺陷：

1.     保护效果不稳定，无法完全阻断感染传播；

2.     会干扰结核菌素皮肤试验，导致无法区分免疫与感染动物；

3.     缺失ESAT-6等关键抗原，难以激发全面免疫记忆。

在流行地区，“检测-扑杀”策略因成本过高难以推行，开发新型疫苗成为突破防控困境的关键。

图 1 重组疫苗株构建验证与电镜形态

研究团队采用反向遗传学技术，将牛分枝杆菌的ESAT-6和TB10.4抗原插入禽流感病毒非结构蛋白NS1基因区域（图1a），构建重组载体疫苗。电子显微镜观察显示（图1c），重组病毒颗粒呈典型球形，保留流感病毒原有结构特征，表面10nm glycoprotein spikes确保抗原有效表达与递呈。

疫苗分为含Montanide Gel佐剂（Group #1）与无佐剂（Group #2）两种配方，通过鸡胚培养制备（图1b），冻干后可长期保存。其中，ESAT-6和TB10.4抗原是牛分枝杆菌毒力核心因子，能激活CD4+与CD8+T细胞介导的细胞免疫，且未包含在BCG中，为后续DIVA（区分感染与免疫动物）诊断奠定基础。

研究团队通过豚鼠与犊牛两大模型，从安全性、免疫原性、保护效力三方面开展系统验证。

图 2 首次免疫后豚鼠体重动态

如图2所示，豚鼠接种疫苗后10天内体重稳定增长，与对照组无显著差异；注射部位无红肿、坏死等炎症反应，组织病理学检查显示肺部结构完整。而犊牛在免疫后体温维持在38.8-39.4℃正常范围，无食欲下降、精神萎靡等异常表现，证明疫苗安全性达标。

图 3 犊牛两次免疫后的免疫应答评估

干扰素-γ（IFNγ）检测结果显示（图3），犊牛接种后7-21天IFNγ水平显著升高，无佐剂组在第5个月达到峰值，且持续12个月维持高水平，明显优于佐剂组与BCG组。这一结果表明，无佐剂疫苗能激发更强效、更持久的细胞免疫，为长期保护提供保障。

图 4 从攻毒豚鼠肺部分离分枝杆菌的结果

攻毒试验后，未免疫对照组（Group #3）豚鼠25-27天内死亡率达30%，肺部出现大面积灰白色坏死灶，细菌载量极高；而疫苗组豚鼠全部存活，肺部损伤指数仅为0.75-0.85（对照组为7.5），无佐剂组保护指数达+0.60 lg（图4）。

图 5 从攻毒犊牛肺部分离分枝杆菌的结果

犊牛试验中（图5），疫苗组肺部细菌载量降至1.83-1.93 lg CFU，且肺部组织仅出现轻微间质炎症，无明显坏死灶，保护效果显著。

该疫苗经豚鼠与犊牛模型验证，安全性与保护效力俱佳，且无佐剂版本表现更优，相关试验数据通过组织病理学观察、细菌载量检测等可视化结果得到充分佐证，为牛结核病防控提供了全新技术方案。研究团队表示，后续将进一步优化疫苗配方，开展田间试验验证，并探索黏膜免疫等更便捷的接种途径。这款疫苗的成功研发，有望替代传统BCG疫苗，成为牛结核病防控的核心工具，为全球畜牧业安全生产与公共卫生安全提供有力支撑。

原文链接：https://doi.org/10.14202/vetworld.2025.2573-2589