肠炎沙门氏菌是欧盟地区人类沙门氏菌病的首要致病菌，2021年占相关感染病例的54.6%，而禽肉及其制品是该致病菌在食物链中的主要传播载体。欧盟已出台多项法规，要求将肉鸡群中肠炎沙门氏菌和鼠伤寒沙门氏菌的流行率控制在1%以下，且新鲜禽肉 25g 样品中需实现目标菌株零检出。传统基于培养的检测方法（如 SO 6579）3-6天才能确认结果，难以满足禽肉等短保质期食品的快速放行需求；现有分子检测技术虽能缩短时间，但普遍无法区分活菌与死菌，易导致假阳性结果。开发兼具快速性、特异性和实用性的活菌检测技术，成为食品微生物安全领域的迫切需求。

关键创新：噬菌体扩增与LAMP技术的协同突破

研究团队创新性地将噬菌体特异性扩增与环介导等温扩增（LAMP）相结合，构建了PA-LAMP检测体系，核心优势体现在三方面：

1. 精准靶向存活致病菌

选用专性裂解肠炎沙门氏菌的噬菌体PVP-SE2作为检测媒介，该噬菌体仅在存活细菌内复制，每感染一个宿主细胞可产生约240个子代噬菌体。通过检测噬菌体DNA而非细菌本身，既确保了检测结果与活菌状态直接关联，又通过噬菌体扩增效应大幅提升检测灵敏度。

2. 双重检测模式适配不同场景

开发了两种检测策略：实时荧光LAMP可实现定量分析，肉眼可视化LAMP通过SYBR Green I染料显色，阳性样品呈绿色、阴性保持橙色，无需昂贵仪器，适配食品加工厂现场检测（PoT）需求。两种模式检测结果完全一致，满足不同检测场景的灵活性需求。

3. 简化流程实现同日检出

优化了前处理与扩增条件：采用简单热裂解方法提取DNA，避免复杂试剂与操作；确定3小时样品预富集（恢复应激菌株活性）+4小时噬菌体共培养的最优组合，配合30分钟LAMP扩增，全程耗时约8小时，可在一个工作班次内完成从样品处理到结果判读的全流程。

性能验证：灵敏度与可靠性双达标防御范围明确

在人工污染禽肉样品的验证中，PA-LAMP 技术表现优异：

①检测限达到1.1 CFU/25 g，LoD₅₀（50% 检出概率）为1.5 CFU/25 g，LoD₉₅（95% 检出概率）为6.6 CFU/25 g，满足欧盟对禽肉沙门氏菌的严格限量要求；

②对冷藏应激处理的肠炎沙门氏菌仍能有效检出，体现了对实际样品中应激菌株的良好适用性；

③与国际标准方法ISO 6579对比，相对灵敏度、特异性、准确度均达到100%，Kappa一致性系数为1.00，表明两种方法结果完全吻合；

④特异性实验显示，该技术对大肠杆菌、肺炎克雷伯菌等非目标菌株及其他噬菌体无交叉反应，仅特异性识别肠炎沙门氏菌。

应用价值：助力食品链安全防控升级

对禽肉加工厂而言，可实现沙门氏菌的快速筛查，避免污染产品流入市场，同时减少因等待检测结果导致的库存积压；检测设备要求低，肉眼可视化模式仅需恒温水浴锅即可完成，降低了中小规模企业的检测成本与技术门槛；仅检测存活致病菌，有效避免死菌 DNA 导致的假阳性结果，减少不必要的产品召回损失。

参考文献

Lamas A, Santos S B, Prado M, et al. Phage amplification coupled with loop-mediated isothermal amplification (PA-LAMP) for same-day detection of viable Salmonella Enteritidis in raw poultry meat[J]. Food Microbiology, 2023, 115: 104341.