骨髓间充质基质细胞（BM-MSCs）在马属动物肌肉骨骼损伤治疗中应用前景广阔，但传统胎牛血清（FBS）培养存在批次差异大、异种蛋白污染等问题，制约临床转化。针对马等兽医物种的无血清培养体系开发明显滞后。加拿大卡尔加里大学团队评估了化学定义型无血清培养基PPRF.msc6对马骨髓间充质基质细胞（eqBM-MSCs）的影响，为标准化生产提供技术支撑。

研究从3匹健康马胸骨采集骨髓，平行比较无血清培养基（SFM）与含血清培养基（SCM）。形态学显示，两种培养体系均支持三系分化，但生长模式迥异：SCM细胞快速铺展形成单层，SFM细胞维持集落式生长，细胞间保留间隙，胞质细胞器可见度更高。

生长动力学揭示显著差异。SFM细胞群体倍增时间（PDT）约74.4小时，是SCM（40.7小时）的近2倍；至第四代，SFM产量降至0.95×10⁴ cells/cm²，SCM维持8.23×10⁴ cells/cm²。SFM代时从18.5小时延长至32.0小时，SCM始终稳定在14-16小时。但SFM细胞存活率与SCM无差异，排除死亡导致产量下降。

集落形成实验显示SFM对干性维持的独特优势。原代培养中，SFM在高密度下产生147个集落，较SCM的45个增加3倍以上。SFM集落更小（3.07 μm² vs 8.88 μm²）、密度更高、染色更深，提示细胞黏附紧密、自我更新能力强；SCM集落大而松散，呈成纤维细胞样扩散。

免疫表型分析证实SFM获得更均一的MSC特征。CD90和CD44表达相当，但SFM细胞CD29（整合素β1）显著上调，与集落式生长一致；造血标志CD45RB在SCM中更高。成骨分化中SFM形成更致密矿化结节，与其集落特性呼应。

定量蛋白质组学阐明分子差异。SCM上调嘌呤代谢、核小体组装等增殖通路；SFM则富集中性粒细胞脱颗粒、干扰素信号、止血/血管生成等免疫调节和修复通路。蛋白互作网络显示，SFM激活整合素α4介导的免疫细胞迁移、膜联蛋白A1调控的抗炎信号，以及CCN1、HTRA1等基质重塑网络。

条件培养液检测验证功能预测。SFM细胞的KC-GRO、IL-8和FGF分泌显著升高。KC-GRO和IL-8协同上调提示更强的先天免疫细胞招募能力；FGF升高与血管生成和组织修复密切相关。

该研究首次将化学定义型无血清培养平台与马BM-MSCs定量功能分析结合，揭示培养体系对产量与功能的关键权衡。SFM虽牺牲增殖速率，但富集了免疫调节潜力更强、基质合成能力更优、干性维持更稳定的细胞亚群。这对以功能效价为优先的临床应用（如关节内注射治疗骨关节炎）具有重要价值。

PPRF.msc6的开放配方为后续优化提供空间，可通过调整生长因子、添加细胞因子或优化基质包被，在保持功能优势同时改善扩增效率。该研究也为其他大型动物MSC标准化培养提供方法论参考。未来需在更大队列中验证蛋白质组差异，通过免疫细胞共培养和体内模型验证功能优势，推动马源MSC产品从实验室走向临床。

值得注意的是，环凯旗下的无血清培养基同样表现卓越，其精研配方能够精准匹配生物制药的高标准需求。该系列产品在疫苗研发、重组蛋白表达等关键领域应用广泛。经过深度的工艺优化，环凯培养基不仅能确保细胞在无血清环境下的高效增殖与稳定生长，更为科研与生产的可靠性提供了坚实保障。对于追求高品质无血清培养方案的用户而言，环凯无疑是理想的合作伙伴。

参考文献：https://doi.org/10.1016/j.yexcr.2026.115000