瞄准流感病毒“关键入口”：鼻喷腺病毒载体疫苗在小鼠中显示H1N1防护潜力

流感病毒容易发生抗原变异，是季节性流感疫苗需要持续更新的重要原因。现有流感疫苗通常以血凝素（hemagglutinin，HA）为主要抗原，但HA头部的大部分区域变异较快，可能导致疫苗诱导的抗体对新出现的变异株识别能力下降。因此，寻找兼具免疫原性和相对保守性的抗原区域，是新型流感疫苗研究的重要方向。

近日，吉林农业大学研究团队在《Microbial Pathogenesis》发表研究，将目光集中在HA头部的受体结合位点（receptor-binding site，RBS）。RBS位于HA分子顶端，负责识别宿主细胞表面的唾液酸受体，是流感病毒附着并进入细胞的关键结构。由于这一位点承担着重要生物学功能，其部分氨基酸受到较强的功能约束，在H1亚型病毒中相对保守。但需要注意的是，这种保守性主要集中于H1亚型，并不意味着其能够覆盖所有甲型流感病毒亚型。

研究人员选取H1N1流感病毒A/Puerto Rico/8/1934株的HA受体结合位点序列，将其插入E1区缺失的人腺病毒5型载体，构建了重组候选疫苗rAd5-GFP-RBS。E1区缺失使该载体不能在普通细胞中自主复制，但可以将目的抗原递送至宿主细胞并表达。研究团队在HEK-293A细胞中观察到绿色荧光和特异性蛋白条带，证实重组载体构建成功。病毒生长曲线显示，插入RBS序列后，载体的增殖动力学未受到明显影响，为后续免疫评价提供了基础。

图1腺病毒载体疫苗（rAd5-GFP-RBS）构建

在动物试验中，研究人员对C57BL/6J小鼠进行两次鼻内免疫，并设置空载腺病毒和磷酸盐缓冲液对照组。加强免疫后，rAd5-GFP-RBS组小鼠血清和支气管肺泡灌洗液中的特异性IgG水平均明显升高，肺组织中的IgA信号也更强。这表明该候选疫苗不仅能够诱导全身性抗体反应，还能在呼吸道局部建立黏膜免疫。对于主要经呼吸道感染的流感病毒而言，黏膜抗体有望在病毒入侵早期发挥阻断作用。

随后，研究人员使用小鼠适应性H1N1 PR8病毒进行攻击。与两个对照组相比，接种rAd5-GFP-RBS的小鼠体重下降程度较轻，存活情况明显改善。肺组织病理学结果显示，接种组的炎症细胞浸润、肺泡结构破坏和组织损伤程度较低；免疫荧光检测也显示，其肺组织中的病毒HA抗原信号明显减少。这些结果说明，针对RBS产生的免疫应答能够在该动物模型中限制病毒感染和肺部病变。

不过，这一研究尚不能直接说明该疫苗可用于人群接种。实验仅评价了针对H1N1 PR8株的保护效果，尚未检测其对其他H1N1变异株或其他流感亚型的交叉保护能力；研究也未将其与传统全长HA疫苗直接比较。此外，免疫保护能维持多长时间、重复使用Ad5载体是否受到既有腺病毒免疫影响，以及疫苗在人群中的安全性和有效性，均有待进一步研究。

从候选抗原筛选到载体疫苗放大，稳定的细胞培养体系同样是研发过程中的基础条件。本研究使用HEK-293A细胞完成腺病毒载体的构建和扩增，并以DMEM作为基础培养基。针对疫苗研发及生物制品实验中的细胞培养需求，环凯提供DMEM、MEM、RPMI 1640、DMEM/F-12及M199等细胞基础培养基，可为细胞扩增、载体制备和工艺条件优化提供配套选择。标准化培养基有助于减少配制差异，为疫苗研发从实验室验证走向稳定工艺奠定基础。

参考来源：LIU B, AZEEM R M, XU B, et al. Evaluation of immune protective efficacy of recombinant adenovirus vector vaccine containing RBS of influenza virus subtype H1N1[J]. Microbial Pathogenesis, 2026, 214: 108383. DOI:10.1016/j.micpath.2026.108383.