利用稳定、高亲和力和低成本纳米探针对于开发实时免疫测定至关重要监测食源性病原体，以保障人类健康。抗体Fc片段与spA的可能相互作用金黄色葡萄球菌上的蛋白质会导致意想不到的干扰。为了解决这一问题，西北农林大学的Zhang Yao等研究人员首次在这里进行了描述根据定义，没有Fc的纳米体的发展小部分这些针对阪崎克罗诺杆菌（C。sakazakii）从展示的专用免疫噬菌体中回收纳米体文库。该粘结剂具有成本低、强度大等优点稳定性、高结合亲和力和足够的负载能力。之后噬菌体介导的夹心酶联免疫吸附试验（ELISA）是通过使用Cs-Nb2作为抗原捕获构建的抗体和噬菌体显示Cs-Nb1作为检测探针。为了进一步提高灵敏度，将3,3′，5,5′-四甲基联苯胺（TMB）底物替换为鲁米诺，建立了化学发光酶免疫分析法（CISA），检测限为1.04×104CFU/mL，回收率为98.15−114.63%。所提出的基于纳米体的噬菌体介导的三明治CLISA显示出多种优势，包括高灵敏度、成本效益、增强的酶负载能力和对基质效应的高抗性，为设计食源性病原体的免疫测定提供了策略。

采用强化免疫技术，对健康的未经免疫的双峰驼注射灭活的阪崎肠杆菌,操作流程如下图所示：

本研究从免疫噬菌体展示的纳米体文库中分离出阪崎肠杆菌特异性Nb。Nb中互补决定区的口袋结构使得能够以高稳定性特异性识别阪崎肠杆菌。以纯化的纳米体作为捕获抗体，以噬菌体展示的纳米体为检测抗体进行配对选择。在最佳条件下，构建了检测阪崎肠杆菌的夹心ELISA，其LOD为1.01×105CFU/mL。为了进一步提高灵敏度，建立了基于鲁米诺化学发光反应的Ph-ELCISA，以取代传统的显色反应，LOD为1.04×104CFU/mL，因此，Ph-ELCSA表现出高灵敏度，LOD比Ph-ELISA提高了10倍，检测纳米体的使用量减少了200倍。此外，并没有观察到和其他病原体的交叉反应。该方法已应用于乳制品样品，具有准确的性能。因此，双纳米体检测模式在检测食源性病原体方面显示出极好的潜力。

Yao Zhao, Xiangrui Liao, Gege Yu, et al. Phage-Displayed Nanobody as a Sensitive Nanoprobe to Enhance Chemiluminescent Immunoassay for Cronobacter sakazakii Detection in Dairy Products. Anal. Chem. 2023, 95, 36, 13698–13707.

DOI: 10.1021/acs.analchem.3c02990