沙门氏菌LAMP检测方法验证研究
沙门氏菌LAMP检测方法验证研究
全球每年约51万例重症感,美国每年导致130万人患病、238人死亡;同时,沙门氏菌污染源极其广泛,涉及谷物、鸡蛋、肉类、农产品、宠物食品等9类ISO食品类别(2018-2025年仅美国就因污染召回109批次食品)。然而,传统“金标准”培养检测法耗时长达5天,亟需快速、可靠且适用于复杂食品基质的筛查方法。
现有分子方法(如实时PCR)依赖精密设备与专业操作,难以在资源有限实验室普及,FDA等机构要求检测方法需通过多实验室、多基质验证才能用于法规监管(如召回决策)。此前环介导等温扩增LAMP仅在少数食品(如动物饲料)中验证,缺乏系统性数据支持其在复杂基质(如高脂花生酱、高菌量生鲜品)的可靠性。美国食品药品监督管理局兽医中心应用科学办公室与多实验室合作,验证沙门氏菌LAMP检测技术在27种人类与动物食品基质中的普适性,以提升食品安全监测效率。2025年5月28日,发表于Food Microbiology的Independent laboratory validation of a Salmonella loop-mediated isothermal amplification assay in 27 human and animal food matrices of 9 ISO food categories一文展现的创新直接推动该技术被FDA采纳为首个跨34种基质的沙门氏菌通用筛查方案,实现从"单基质验证"到"系统性覆盖"的跨越,为全球食品安全监测体系提供高效标准化工具。
本研究通过多实验室协作验证,对27种食品基质(分属9类ISO标准)采用标准化的LAMP检测流程(预增菌按BAM手册执行,LAMP筛查在Genie II或7500 Fast平台运行)(图1),关键结果如下:
1、灵敏度与可靠性:所有基质均满足监管要求——未接种对照100%阴性(无污染),低剂量接种阳性率25–50%(符合25–75%分数回收率),且LAMP与BAM培养法一致性达99.4%,其中生乳(RLOD=0.535)、液态蛋(0.863)等基质中LAMP灵敏度显著优于BAM;
2、平台与预增菌影响:双平台(Genie II和7500 Fast)检测性能无统计学差异(P>0.05),但UPB预增菌液比LB平均缩短检测时间0.93分钟(P<0.001,图3a);
3、抗干扰能力:即使在高菌量基质(如生菜APC达1.6×10⁷ CFU/g)中,LAMP仍保持100%阳性率(图2),熔解温度稳定在89±2°C(图3b),证实方法对复杂食品基质的普适性。
图1 样品分析工作流程示意图
图2 27种人类和动物食品基质的APC和按食品类别分列的平均值
图3 小提琴图展示本研究所有LAMP阳性数据点的检测时间与产物熔解/退火温度
然而,高抑制性基质(如香料)中DNA提取效率仍需优化,资源有限地区推广需进一步降低设备成本(如开发恒温扩增替代电化学检测)。文章提出,终极目标为建立覆盖"从农场到餐桌"全链条的沙门氏菌智能监测网络,通过LAMP技术将爆发疫情响应时间从周级缩短至小时级,重塑全球食品安全防御体系。
参考文献链接:https://doi.org/10.1016/j.fm.2025.104821
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