中国犊牛首现Tusavirus全基因组！98.3%“羊身份”实锤跨物种传播

2025年9月，上海探普生物客户内蒙古民族大学预防兽医学实验室的温树波（通讯作者）、宋扬（第一作者），在《Virologica Sinica》杂志上发表了题为《First identification of Tusavirus in calf intestinal tissue suggests interspecies transmission and genomic variation》的文章，该研究首次在中国内蒙古东部腹泻犊牛肠组织中鉴定出Tusavirus（TuV），获得其全基因组序列（4363nt），发现该毒株与英国羊源毒株OTV/0215亲缘关系最近（核苷酸同源性98.3%），但在VP1和VP2基因分别存在3nt插入与缺失，提示TuV可在反刍动物间跨种传播且发生基因组变异。

研究背景

Tusavirus（TuV）是2014年首次在突尼斯腹泻患儿粪便中发现的一种新型细小病毒（Parvoviridae科，Protoparvovirus属）。此后，TuV在人和多种动物（如羊、山羊）粪便样本中被零星检测到，提示其可能具有跨种传播潜力。然而，TuV的宿主范围、遗传多样性及潜在的动物储存宿主尚不明确。中国此前尚未报道TuV的存在，其在牛群中的感染情况也未见研究。

研究方法

1、样本采集与处理
该研究采集了2022–2024年间内蒙古东部地区因腹泻死亡的犊牛肠组织样本，共52份（初筛22份，后续扩展30份）。

2、宏病毒组测序与序列获取

对样本进行宏病毒组测序，并通过巢式PCR扩增TuV NS1基因片段，验证TuV的存在。

基于测序结果和参考毒株Tu491设计4对重叠引物，通过PCR扩增和Sanger测序，拼接获得TuV毒株NM21C6的完整编码序列（4363 nt）。

3、生物信息学分析

与GenBank中所有已报道的TuV全基因组序列进行比对，分析核苷酸和氨基酸同源性。构建NS1、VP1、VP2基因的系统发育树，分析其进化关系。比对保守功能域和氨基酸序列，分析突变位点及其可能的功能影响。

研究结果

01宏病毒组测序与验证 

在22份初筛样本中，仅1份犊牛肠组织检测为TuV阳性，后续30份样本均为阴性，表明TuV在该地区犊牛中感染率较低。通过PCR扩增和Sanger测序获得TuV毒株NM21C6的完整编码序列（4363 nt），包含NS1、VP1、VP2三个主要开放阅读框，基因组结构与已知TuV一致。

图1A：通过Illumina测序检测病毒种类及其相对丰度

02与羊源毒株高度同源，提示跨种传播 

NM21C6与英国羊源毒株OTV/0215核苷酸同源性高达98.3%，在NS1、VP1、VP2基因的系统发育树中均与羊源毒株聚为一支，提示其可能存在反刍动物间的跨种传播。

发现VP1和VP2基因存在插入与缺失突变，NM21C6在VP1基因存在一个3 nt插入（aa131位）和一个3 nt缺失（aa563位），该缺失也导致VP2蛋白在aa412位缺失一个氨基酸。这些突变可能影响病毒结构或功能，但其生物学意义尚需进一步研究。

保守功能域基本保持完整，尽管存在插入/缺失突变，NM21C6仍保留了NS1的复制起始位点、ATP结合位点，VP1的PLA2结构域及VP2的保守甘氨酸富集区等关键功能域，显示其仍具备基本复制和感染能力。

图1B：TuV NS1基因构建的系统发育树

总结

1、首次在中国发现TuV，并鉴定其天然宿主为牛

本研究首次报道中国存在TuV感染，且宿主为犊牛，扩展了TuV的地理分布和宿主谱。

2、首次获得中国牛源TuV全基因组序列

填补了国内TuV基因组数据的空白，为后续研究提供了重要的遗传信息资源。

3、提供TuV跨种传播的有力证据

通过系统发育和序列比对分析，发现牛源毒株与羊源毒株高度同源，强烈提示TuV可在反刍动物间跨种传播，牛和羊可能作为互联的病毒储存宿主。

4、发现新的基因组变异位点

首次报道TuV在VP1和VP2基因中存在特定的插入和缺失突变，为研究TuV的遗传多样性和潜在的功能适应性提供了新线索。