不用抗体也能精准抓菌!科学家开发“自供氧纳米酶试纸”,15分钟快速检出沙门氏菌
从乳制品到肉制品,从生鲜蔬果到即食食品,沙门氏菌始终是全球食品安全监管面临的重要挑战之一。作为导致食源性疾病最常见的病原菌之一,鼠伤寒沙门氏菌(Salmonella typhimurium)每年引发大量食物中毒事件,对食品加工、流通和监管体系提出了更高要求。近日,西北农林科技大学、鲁东大学等机构研究团队在国际顶级传感器期刊《Biosensors and Bioelectronics》发表最新研究成果,研发出一种基于自供氧纳米酶(Self-oxygenating Nanozyme)的新型侧向层析检测试纸(LFIA)。该技术不仅摆脱了传统检测对双抗体体系的依赖,还利用空气中的氧气实现信号自动放大,可在15分钟内完成沙门氏菌快速检测,为现场食品安全监测提供了更简单、更经济的新方案。
最大创新:不用“捕获抗体”也能抓住细菌
传统胶体金试纸或免疫层析试纸普遍采用“双抗体夹心法”。简单来说,需要:一种抗体负责捕获细菌;另一种抗体负责检测细菌;两种抗体必须识别不同表位。然而,高质量抗体筛选往往耗时长、成本高,而且容易受到抗体失活、批次差异等因素影响。研究团队选择了一条全新的技术路线。他们发现,许多肠道致病菌表面存在FimH黏附蛋白,该蛋白对甘露糖(Mannose)具有天然高亲和力。基于这一特点,研究人员将甘露糖修饰到锰基普鲁士蓝类似物(Mn-PBA)纳米材料表面,构建出一种新型功能化纳米酶——Man-MPN(甘露糖功能化锰基普鲁士蓝纳米酶)。这种材料既是识别元件,也是信号放大元件,实现了“识别+检测”二合一。研究结果表明,Man-MPN能够通过甘露糖-FimH特异性相互作用直接吸附在鼠伤寒沙门氏菌表面,从而替代传统捕获抗体完成细菌富集。TEM、电位分析和光谱检测均证实了这种稳定结合。
不需要过氧化氢,空气就能驱动显色反应
除了识别能力,这项研究最大的亮点还在于其“自供氧催化机制”。目前大多数纳米酶显色体系依赖过氧化氢(H₂O₂)作为反应底物,但H₂O₂容易分解,对储存条件和检测环境要求较高。此次开发的Man-MPN纳米酶则展现出优异的氧化酶样活性。其内部Mn²⁺/Mn³⁺氧化还原循环能够持续激活空气中的溶解氧,将无色TMB底物直接氧化为蓝色产物(ox-TMB),无需额外添加过氧化氢。换句话说:空气中的氧气就是反应原料。这一设计使检测体系更加稳定、操作更简单,也降低了现场检测对试剂储存和运输条件的要求。
灵敏度提升10倍,15分钟获得结果
在检测流程中将Man-MPN加入待测样品;纳米酶捕获目标细菌;复合物在试纸上迁移并被检测线固定;滴加TMB显色液;纳米酶催化产生蓝色信号,实现原位放大。实验数据显示:常规检测模式下肉眼检测限为 10⁴ CFU/mL;
经纳米酶催化放大后,检测限降至 10³ CFU/mL;灵敏度提高约 10倍;整个检测过程仅需 15分钟。同时,在10³–10⁷ CFU/mL浓度范围内,检测信号与细菌浓度保持良好的线性关系,为定量分析提供了可靠基础。对于食品企业和监管部门而言,这意味着无需复杂实验设备即可实现快速初筛。
图1 基于Man-MPN的生物传感器示意图[1]
抗干扰能力突出,多种细菌不会“误报”
快速检测技术最担心的问题之一就是假阳性。为了验证特异性,研究人员采用多种常见食源性病原菌进行交叉测试,包括:金黄色葡萄球菌、单核细胞增生李斯特菌、志贺菌、铜绿假单胞菌,多种非目标沙门氏菌血清型等。
结果显示:即使干扰菌浓度达到10⁸ CFU/mL,试纸检测线依然几乎没有显色信号,而目标鼠伤寒沙门氏菌则产生明显响应。论文指出,所有非目标菌交叉反应率均低于5%,显示出良好的检测专一性。
牛奶、果汁、鸡肉实测验证成功牛奶、果汁、鸡肉实测验证成功
为了评估实际应用价值,研究团队进一步在真实食品样品中开展验证实验。研究人员向:橙汁、牛奶、鸡肉样品中分别添加不同浓度的沙门氏菌。
检测结果显示:橙汁样品,催化后检测限达到:10³ CFU/mL。牛奶样品,催化后检测限达到:10³ CFU/mL。鸡肉样品,催化后检测限达到:5×10³ CFU/mL。
此外,平均回收率为 83.22%–109.49%、相对标准偏差(RSD)低于 9.55%。表明该方法在复杂食品基质中依然具有较高准确性和可靠性。
可保存20天以上,适合基层现场检测
对于现场快速检测产品而言,稳定性同样重要。研究显示:Man-MPN纳米酶在4℃储存20天后仍保持90%以上活性;60℃高温处理后仍保留88.77%的催化能力;明显优于传统辣根过氧化物酶(HRP)体系。这种稳定性使其具备进入基层检测、冷链物流监测以及食品企业自检体系的潜力。
或将推动下一代智能食品检测产品发展
当前全球食品安全检测技术正朝着“快速化、便携化、低成本化”方向发展。与传统PCR、ELISA等实验室检测技术相比,本研究开发的Man-MPN纳米酶试纸具有:无需复杂仪器;无需双抗体配对筛选;无需额外过氧化氢底物;检测速度快;成本低;适合现场应用等优势。研究团队认为,通过进一步优化纳米材料设计和信号放大策略,该技术未来有望实现更低检测限,并与智能手机读数系统、便携分析设备相结合,构建新一代数字化食品安全监测平台。
参考文献
[1] Deng Z, Tian J, Zhao L, Liu X, Yin X, Wang J, Zhang D, Darwish IA. Self-oxygenating nanozyme-based biosensor for rapid detection of Salmonella typhimurium. Biosensors and Bioelectronics. 2026, 293:118162. DOI: 10.1016/j.bios.2025.118162.
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