HAZV病毒可以作为CCHFV病毒疫苗研究的替代物

蜱虫作为虫媒病毒一大传播途径，可以通过叮咬向人类传播病毒。我国学者在我国北方地区发现的一种新蜱传人RNA病毒——湿地病毒（Wetland virus，WELV），该病毒属于Orthonairovirus的一种。目前在全球，不断发现有新的蜱传病毒。其中，CCHFV（Crimean-Congo Hemorrhagic Fever Virus）是分布最广泛的一种蜱传病毒，同属于Orthonairovirus，具有极高的致命性。目前没有预防药物也有没有特效治疗药物，对CCHFV的预防性研究有重大意义。《Cross-Reactive Anti-Nucleocapsid Protein Immunity against Crimean-Congo Hemorrhagic Fever Virus and Hazara Virus in Multiple Species》一文中，研究了与CCHFV结构和系统发育相似，且相对安全的病毒类似物——HAZV（Hazara Virus），这两种病毒在人、兔和小鼠中核衣壳蛋白（NP）的免疫学相似性，并强调了HAZV作为CCHFC替代模型的潜在效应。

1. 生成高度纯化的 HAZV 重组 NP（rNP）

诱导HAZV rNP的表达后，在变形条件下进行纯化，SDS-PAGE进行纯度鉴定（图1）。通过使用抗His抗体的 Western blotting 来检测c端His标记的HAZV rNP 的鉴定（图2A）。

图1

图2

2. HAZV rNP与CCHFV恢复期人血清的交叉反应

在这项研究中，对 20 份 CCHFV 阳性和 20 份 CCHFV 阴性血清样本进行了检测，用商业酶联免疫吸附测定（ELISA）试剂盒，以确定与HAZV rNP的交叉反应性。

图 3

基于 HAZV rNP 的酶免疫测定（EIA）检测 CCHFV 抗体阳性和阴性人血清的敏感性和特异性分别为 80% 和 90%（图3A）。另一方面，基于 CCHFV rNP 的 EIA 检测 CCHFV 抗体阳性和阴性人血清的敏感性和特异性均为 90%（图3B）。这些结果表明，在 CCHFV 感染受试者的恢复期血清中测试的 HAZV 和 CCHFV 的 NP 之间存在令人信服的抗原相似性和交叉反应性。

3. HAZV NP 和 CCHFV NP 在多个物种中的抗原相似性

通过蛋白质印迹和EIA检测HAZV rNP与CCHFV免疫的兔子和小鼠以及CCHFV NP免疫的小鼠血清中发现的抗体的反应。

为了研究 CCHFV 和 HAZV 之间的抗原关系，首先在蛋白质印迹实验中测试了这些病毒的交叉反应性，其中抗 CCHFV 小鼠和兔以及抗 CCHFV NP小鼠血清用作一抗（图2A）。在这些测定中，HAZV 感染的细胞裂解物和未感染的细胞裂解物在蛋白质印迹实验中以相同的蛋白质浓度作为抗原，并且在所有阳性血清样品的凝胶上检测到 55kDa 蛋白条带，验证了对两种病毒的 NP 的抗原交叉反应性（图2B）。同样，在EIA中，我们使用 HAZV rNP 作为抗原来检测抗 CCHFV 兔和小鼠血清作为一抗（图4）。

HAZV 和 CCHFV 的 NPs 在针对 CCHFV 全病毒和 CCHFV NP 的兔和小鼠多克隆抗血清记录了 HAZV 和 CCHFV 的 NP 之间的强烈交叉反应。

图 4

图5使用 CCHFV-rNP 免疫的小鼠血清进行EIA滴定曲线

用 1/1,000 的初始稀释度测试两倍连续稀释的抗 CCHFV NP 小鼠血清，即使在 1/32,000 的稀释度下，CCHFV rNP 和 HAZV rNP 也能够在血清中捕获抗体（图5）。

参考文献：

Kalkan-Yazıcı M,Karaaslan E, Çetin NS,Hasanoğlu S, Güney F, Zeybek Ü, Doymaz MZ,2021.Cross-Reactive Anti-Nucleocapsid Protein Immunity against Crimean-Congo Hemorrhagic Fever Virus and Hazara Virus in Multiple Species. J Virol95:10.1128/jvi.02156-20.https://doi.org/10.1128/jvi.02156-20