耐甲氧西林金葡菌(MRSA)已成为威胁全球人类健康的重要病原菌之一。常规的检测方法主要包括表型检测(显微镜等)和分子方法(PCR、LAMP、RPA等)。近年来，一种基于噬菌体的检测方法在甲氧西林存在下检测金黄色葡萄球菌特异性噬菌体的扩增，被认为是一种最具前景的新表型检测方法2。尽管分子方法具有高灵敏度和特异性等特点，但其需要昂贵的仪器投入、专业技术人员以及复杂的操作，由此限制了其可使用范围。因此，本研究旨在构建一个快速和精密核算检测平台以鉴定金葡菌和MRSA。

  该研究首先基于耐热核酸酶(nuc)和mecA基因设计特异性sgRNAs，构建一个CRISPR-Cas12a的监测体系。为增加该体系的检测灵敏度，将其与PCR，LAMP以及RPA方法结合使用。接着，将以上三种方法分别与CRISPR-Cas12a配对，并将其实验结果相互进行比较。最后，通过对111株临床分离株的荧光输出值进行分析比较，得出的以上方法在临床上的检测效果。为能使实验结果可视化，我们使用了一种可以进行床边检测的横向流动测试条技术。在比较了三种不同方法的灵敏度和特异性后，实验结果表明，nuc-LAMP-Cas12a和mecA-LAMP-Cas12a为最佳的检测方法。nuc-LAMP-Cas12a方法的检测限为10 aM(~ 6copies mL21)，而mecA-LAMP-Cas12a的检测限为1 aM(~ 1copies mL21)。两个检测平台的基因组DNA检测均为4x 103 fg/μL。通过111临床分离株对其检测效果进行批判性评价，两种方法以及横向流动测试条技术的荧光输出结果显示其具有100%的特异性和灵敏度。现有的反应的总检测时间约为80分钟(基于荧光输出值)或85分钟(基于横向流动测试条实验结果)。以上结果表明，nuc-LAMP-Cas12a和mecA-LAMP-Cas12a两个检测平台是具有快速准确鉴定金葡菌和MRSA的前景技术。

  参考文献

  1 Cao, X. et al. Cas12a/Guide RNA-Based Platforms for Rapidly and Accurately Identifying Staphylococcus aureus and Methicillin-Resistant S. aureus. Microbiol Spectr 11, e0487022, doi:10.1128/spectrum.04870-22 (2023).

  2 Idelevich, E. A. et al. Bacteriophage-based latex agglutination test for rapid identification of Staphylococcus aureus. J Clin Microbiol 52, 3394-3398, doi:10.1128/jcm.01432-14 (2014).