基于LAMP-LFD的副溶血性弧菌快速检测技术研究

原创

来源：蔡伟程

2025-05-16 10:31:21

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核心提示：本文研究了基于环介导等温扩增结合侧流层析装置（LAMP-LFD）的副溶血性弧菌快速检测技术。副溶血性弧菌是海鲜产品中的主要致病菌，传统检测方法存在耗时长、操作复杂等局限性。LAMP-LFD方法具有高灵敏度、特异性，操作简便，检测快速（仅需1.5小时），适合基层和现场使用。实验表明其灵敏度优于传统PCR方法，可更早发现污染源，具有广阔应用前景，有望成为海鲜产品中副溶血性弧菌检测的首选方法。

在食品安全领域，副溶血性弧菌（Vibrio parahaemolyticus）一直是海鲜产品的主要致病菌之一，其引发的食物中毒事件在全球范围内屡见不鲜。随着我国沿海地区水产养殖规模的不断扩大，海鲜产品中副溶血性弧菌的污染问题愈发凸显，严重威胁着消费者的健康。然而，传统的检测方法存在耗时长、操作复杂等局限性，难以满足快速检测的需求。近期，一项创新的检测技术——环介导等温扩增结合侧流层析装置（LAMP-LFD）方法的开发，为解决这一难题带来了曙光。

副溶血性弧菌：海鲜中的隐形杀手

副溶血性弧菌是一种具有嗜盐特性的革兰氏阴性杆菌，广泛存在于河流、海洋和沿海环境中，同时也常出现在盐渍和加工的海鲜产品中。这种细菌是水产品中最常见的食源性病原体，其引发的食物中毒症状多样，包括胃肠炎、伤口感染和败血症等，其中胃肠炎症状表现为恶心、呕吐、腹痛、腹泻、发热和寒战等。自20世纪50年代日本大阪首次记录副溶血性弧菌食物中毒事件以来，全球范围内此类事件不断增加，副溶血性弧菌已成为全球关注的食源性病原体之一。在我国沿海地区，副溶血性弧菌的检出率居高不下，成为沿海地区和岛屿最常见的食物中毒病原体。

传统检测方法的局限性

目前，检测副溶血性弧菌的方法主要有传统培养法、免疫学检测和核酸扩增检测等。传统培养法虽然准确可靠，但过程繁琐、耗时长，难以满足快速检测的市场需求。免疫学检测虽无需细菌富集，但假阳性率较高。而基于核酸扩增的分子生物学技术虽具有高灵敏度和特异性，但依赖于复杂的仪器设备和专业技术人员，操作成本较高，且检测时间较长，难以实现现场快速检测。

LAMP-LFD：快速检测的新突破

针对传统检测方法的不足，研究人员开发了一种结合环介导等温扩增技术（LAMP）和侧流层析装置（LFD）的快速检测方法——LAMP-LFD。

该方法具有高度的特异性和灵敏度，能够特异性地检测出副溶血性弧菌，而对其他相近的弧菌种类如创伤弧菌、河弧菌、霍乱弧菌和溶藻弧菌以及常见的病原体如大肠杆菌等均为阴性反应。

图1 LAMP-LFD 的特异性分析结果。A. LAMP 产物的 2% 凝胶电泳图；B. PCR 产物经 1% 凝胶电泳检测；C. LAMP-LFD 检测方法。

该方法最低可检测到浓度为1.5×10² cfu/mL的副溶血性弧菌纯培养细菌液，且能在组织样本中检测到浓度为0.75×10³ cfu/mL的病原体。整个检测过程仅需1.5小时，大大缩短了检测时间，提高了检测效率。

图2 LAMP - LFD 的灵敏度分析结果。A. LAMP 产物的 2% 凝胶电泳图；B. PCR 产物经 1% 凝胶电泳检测；C. LAMP - LFD 方法检测结果。

LAMP-LFD的优势与应用前景

LAMP-LFD方法的开发，为副溶血性弧菌的快速检测提供了一种全新的解决方案。与传统的检测方法相比，LAMP-LFD具有诸多显著优势。首先，该方法操作简便，对设备依赖性低，无需复杂的仪器设备和专业技术人员，只需一台恒温金属浴和LFD试纸条即可完成检测，适合在基层和现场环境中使用。其次，LAMP-LFD具有高灵敏度和特异性，能够快速、准确地检测出副溶血性弧菌，有效避免了假阳性和假阴性的结果。此外，该方法检测速度快，从样本处理到结果读取仅需1.5小时，大大提高了检测效率，能够及时发现污染源，为食品安全监管和疾病防控提供有力支持。

在实际应用中，LAMP-LFD方法展现出了广阔的应用前景。研究人员通过人工污染虾肉组织实验验证了该方法的可行性。实验结果表明，LAMP-LFD和LAMP-AGE方法能够从浓度为1.5×10³ cfu/mL的细菌液污染的虾肉组织中检测出副溶血性弧菌，而传统的PCR方法只能从浓度为0.75×10⁵ cfu/mL的虾肉组织匀浆中检测到病原体。这表明LAMP-LFD方法在检测灵敏度上具有明显优势，能够更早地发现污染源，为食品安全监管提供更有力的技术支持。

图3 人工污染副溶血性弧菌的虾组织样本的 LAMP-LFD 分析结果。A. LAMP 产物的 2% 凝胶电泳图；B. PCR 产物经 1% 凝胶电泳检测；C. LAMP-LFD 检测方法。

结语

副溶血性弧菌的污染问题一直是海鲜食品安全领域的重大挑战。LAMP-LFD方法的开发，为解决这一难题提供了新的思路和手段。其操作简便、灵敏度高、特异性强、检测速度快等优势，使其在基层和现场检测中具有广阔的应用前景。随着技术的不断完善和推广，LAMP-LFD方法有望成为海鲜产品中副溶血性弧菌检测的首选方法，为保障消费者的健康和食品安全做出重要贡献。

参考文献：

Liang X, Zhan D, Huang X, et al. Development of Vibrio parahaemolyticus sensitive and specific loop-mediated isothermal amplification combined with lateral flow device[J]. Biomedical Papers, 2025.