新型金纳米花免疫层析传感器:快速检测多种沙门氏菌

新型金纳米花免疫层析传感器:快速检测多种沙门氏菌

原创
来源:蔡伟程
2025-06-13 09:27:10
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核心提示:本文介绍开发了一种基于金纳米花的免疫层析传感器,用于快速检测多种沙门氏菌的研究。该传感器利用广谱沙门氏菌抗体,能够检测包括13种标准菌株和8种野生菌株在内的六种沙门氏菌。检测过程仅需5分钟,可视化检测限低至10⁴ CFU/mL,经富集后检测限可达1 CFU/mL。

沙门氏菌作为常见的人畜共患病原体,已发现超2600种血清型,可通过污染的肉、蛋、奶等食品感染人类,引发发热、腹泻等症状,延误治疗会增加死亡风险。其在食品供应链各环节均可侵入,且不同菌株致病机制与毒性差异大,传统检测方法如PCRELISA等虽比平板培养法高效,但存在需专业设备、操作复杂、成本高等局限,而现有研究多聚焦灵敏度提升,广谱检测技术匮乏。

创新点及优势:金纳米花与自配对抗体的突破

金纳米花探针:具有高表面积和良好理化性质,作为标记物可增强检测信号,其紫外吸收峰偏移及粒径、电位变化验证了与抗体的成功偶联,提升了传感器灵敏度。

单克隆抗体自配对:制备的mAb 2D6可同时作为检测抗体和捕获抗体,形成“三明治”结构,无需寻找配对抗体,降低成本与时间,且能识别多种沙门氏菌共有的抗原表位。

多菌种广谱检测:突破传统ICA传感器单菌株检测局限,可同时检测6种沙门氏菌(含21株),覆盖ABC1血清群,避免漏检风险。

快速与高灵敏度:检测过程5分钟内完成,可视化检测限达10⁴ CFU/mL,食品样本经6-8小时富集后,检测限低至1 CFU/mL

1 用于沙门氏菌检测的免疫层析传感器的示意图(A)金纳米花-单克隆抗体的制备流程;(B)免疫层析传感器的结构;(C)用于沙门氏菌检测的免疫层析传感器的原理。

研究结果:从实验室到实际应用的验证

灵敏度与特异性:对6种沙门氏菌的可视化LOD4.6×10⁴ - 8.9×10⁴ CFU/mL之间,与20种常见食源性病原体无交叉反应,存储于4℃至少6个月性能稳定。

2 免疫层析传感器对六种沙门氏菌的检测灵敏度。(A)不同浓度沙门氏菌的传感器检测图像;(B)六种沙门氏菌在传感器上的显色强度;(C)六种沙门氏菌浓度的校准曲线。

 

3 A)免疫层析传感器对41株沙门氏菌的广谱检测;(B)免疫层析传感器的交叉反应试验(菌株浓度为108 CFU/mL),以0.01M PB缓冲液作为空白对照)。

实际样本检测:在饮用水、橙汁中检测限为10⁴ - 10⁵ CFU/mL,牛奶中因蛋白干扰部分菌株检测限略高,鸡肉和鸡蛋样本经富集后可检出1 CFU/mL的沙门氏菌。

4 食品样本中六种沙门氏菌的检测。(A)甲型副伤寒沙门氏菌;(B)鼠伤寒沙门氏菌;(C)乙型副伤寒沙门氏菌;(D)海德堡沙门氏菌;(E)圣保罗沙门氏菌;(F)肠沙门氏菌;(a)饮用水;(b)橙汁;(c)牛奶。

 

5 真实食品样本中沙门氏菌的检测结果。(A)甲型副伤寒沙门氏菌;(B)鼠伤寒沙门氏菌;(C)肠沙门氏菌;(a)鸡肉;(b)鸡蛋。

对比优势:与其他ICA传感器相比,该传感器检测菌种更多,无需复杂标记和昂贵设备,性能相当或更优。

1 不同用于沙门氏菌检测的免疫层析传感器的比较

 

讨论:技术价值与现实挑战

广谱检测机制:沙门氏菌属保守抗原表位的存在,使mAb 2D6能识别多种菌株,基因组分析显示其可能靶向O抗原等保守结构。

基质效应影响:食品中的蛋白质、多糖等成分会干扰检测,如牛奶中酪蛋白占据抗体识别位点,未来需优化样本前处理或开发抗干扰试剂。

检测流程优化:结合细菌富集培养,可突破检测限限制,但需平衡富集时间与现场检测时效性需求。

总结与展望:守护食品安全的未来

本研究开发的金纳米花免疫层析传感器,为沙门氏菌现场快速检测提供了高效、经济的解决方案,在食品安全监管与公共卫生领域具重要应用潜力。未来将扩大检测菌株范围,通过生物信息学挖掘保守抗原表位,深入解析广谱检测机制,同时优化抗基质干扰技术,提升传感器在复杂食品样本中的检测性能,推动其在食品产业链各环节的广泛应用。

参考文献:

Wang Y, Wu Y, Wu Y, et al. A gold nanoflower particle-based immunochromatographic assay sensor for on-site detection of six species of Salmonella in water and food samples[J]. Analytica Chimica Acta, 2025, 1350: 343813.

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