全球抗生素耐药性危机严峻，寻找对抗“超级细菌”的新武器迫在眉睫，噬菌体疗法（利用捕食细菌的噬菌体精准清除病原体）重获关注。但它广泛应用存在关键瓶颈，即如何快速、准确判断某种噬菌体能否有效杀死患者体内特定细菌。传统主流检测方法如双层琼脂覆盖斑点法虽可靠但耗时长，对危重病人无法使用，且检测技术依赖昂贵设备，难以推广。现在，来自西班牙塞维利亚大学的研究团队带来了一项突破性的解决方案：一种名为ColorPhAST（噬菌体活性敏感性比色检测）的全新检测技术，仅需短短2小时，成本极低，且肉眼即可判读结果，为噬菌体疗法的普及带来了革命性的希望。

ColorPhAST的核心原理巧妙而直观，堪称一场发生在试管内的微型“颜色革命”。研究人员设计了一种特殊的测试溶液，包含穆勒-欣顿肉汤（MHB）、葡萄糖和一种名为酚红的pH指示剂。这种溶液在初始状态下呈现橙色。当引入目标细菌（如大肠杆菌）时，如果细菌存活并活跃，它们会代谢溶液中的葡萄糖，产生酸性物质。随着溶液pH值下降，酚红指示剂就会从橙色转变为黄色。ColorPhAST的“魔法”在于引入了噬菌体。对于待测的细菌样本，会设置两个检测孔：一个仅含细菌和测试溶液（作为对照），另一个则额外加入特定噬菌体悬液（浓度约为10^8 PFU/mL）。将这两个孔在37°C下振荡孵育2小时后，观察颜色变化：如果噬菌体能够有效裂解（杀死）细菌，那么含有噬菌体的孔中细菌无法生长代谢，溶液颜色将保持橙色不变；反之，如果细菌对该噬菌体具有耐药性，它们会继续生长代谢产酸，导致溶液变为黄色。通过这种简单的“橙色=敏感（噬菌体有效）”、“黄色=耐药（噬菌体无效）”的肉眼判读，就能快速得出结果。

为了验证ColorPhAST的可靠性，研究团队使用了100株临床分离的大肠杆菌进行测试。这些菌株事先已通过传统的金标准方法（双层琼脂覆盖斑点法）确定了其噬菌体敏感性：其中45株对测试噬菌体敏感，55株耐受。ColorPhAST的测试结果令人振奋：它成功识别出了全部55株耐药菌株（特异性高达100%，意味着没有假阳性），并且在45株敏感菌株中，正确识别出了43株（灵敏度为95.6%，仅有2株假阴性）。此外，其阳性预测值（PPV）达到100%，阴性预测值（NPV）为96.5%。这意味着，如果ColorPhAST显示“敏感”，则该噬菌体几乎肯定有效；如果显示“耐药”，则其判断的准确性也非常高。尤其值得一提的是，研究人员指出ColorPhAST甚至能识别出某些在传统方法中可能被误判为敏感（因为表现为“延迟裂解”或“部分裂解”）的耐药菌株，因为它直接监测的是细菌实时的代谢活性——细菌如果只是“装死”或暂时被抑制而非真正被裂解，其代谢活动可能仍在进行，导致溶液变色而被识别为耐药。

除了直观的肉眼观察，研究团队还探索了ColorPhAST自动化的可能性。他们通过测量溶液在569 nm波长处的吸光度变化（ΔAbs）来实现这一点。结果显示，孵育2小时后，噬菌体敏感菌株和耐药菌株之间的ΔAbs值存在显著差异，为未来开发自动化、高通量的检测设备奠定了基础。在成本方面，ColorPhAST的优势极为突出。测试所需的试剂（MHB、葡萄糖、酚红）和耗材（如96孔板）价格低廉。研究人员估算，使用该技术检测一个细菌样本对94种不同噬菌体的敏感性，总成本仅需约4.5欧元，平均每次检测成本不到0.05欧元（约合人民币0.4元）。这种“平民化”的价格，加上无需昂贵仪器（基础版肉眼判读即可）和操作简便的特点，使得ColorPhAST具备了在全球范围内广泛应用的潜力，特别是在发展中国家和基层医疗机构。

当然，如同所有新技术，ColorPhAST也存在一些局限性。它无法像传统方法那样测定噬菌体的具体滴度（浓度），也难以检测那些裂解过程非常缓慢（延迟裂解）的噬菌体或区分细菌是真正死亡还是处于休眠状态。其核心价值是在2小时内以极低成本、高准确度地判断噬菌体对目标细菌是否有效，足以使其成为噬菌体疗法临床应用的关键助推器。

目前，这项技术已在西班牙多家医院进入临床试验阶段。未来研究人员甚至计划开发配套的智能手机应用程序，通过拍摄检测孔的颜色照片即可自动分析结果，进一步降低技术门槛。ColorPhAST的诞生，标志着人类在对抗耐药菌的战役中，拥有了更快速、更精准的“侦察兵”。它有望显著缩短诊断时间，加速个性化噬菌体疗法的实施，为那些面临“无药可用”困境的患者带来新的生机。

参考文献：

ColorPhAST a visual rapid colorimetric assay for detecting phage-susceptibility in Escherichia coli