免疫测定（ Immunoassay）是一种体外检测方法，它利用抗原-抗体相互作用的特异性来检测或定量样本中的特定抗原或抗体。由于血清常被用作抗体的来源，因此体外抗原-抗体相互作用的研究被称为血清学，而免疫测定也被称为血清学检测（Serological tests）。一般来说，血清学检测意味着检查患者的血液以寻找针对某种疾病的特定抗体，从而诊断疾病。未曾接触过特定病原体的人通常缺乏针对该微生物的特定抗体，被称为血清阴性（Seronegative）。一旦感染，该人大约在一周或两周后就会开始产生可检测到的特定抗体水平，从而变为血清阳性（Seropositive）。随着感染的进展，会产生越来越多的特定抗体。特定抗体浓度的升高（titer，滴度）是活动性感染的特征。相反，低但稳定的特定抗体水平表明是之前的感染或接种疫苗所致。根据具体情况，免疫测定中使用的抗体可以是单克隆（Monoclonal）的或多克隆（Polyclonal）的。正如上一节所述，单克隆抗体仅识别一个抗原表位，因为它是由单个 B 细胞的克隆所产生的。多克隆抗体则能识别同一抗原上的多个抗原表位，因为它们是由对该抗原产生反应的一组 B 细胞的克隆所产生的。抗人 IgG 抗体（Anti-human IgG antibodies）能与任何人类 IgG 分子的恒定区结合。抗人 IgG 抗体是从被人类血清中的 IgG 免疫化的动物身上获取的。使用标记抗体的免疫测定法。当抗体用可检测的标记物（如酶、荧光染料或放射性同位素）进行标记时，其位置就可以被追踪。科学家们可以据此确定抗体是否附着于抗原上。使用标记抗体的检测方法的一个优点是它们相对灵敏。标记抗体可用于检测特定的细菌或其他抗原，以识别该抗原。荧光抗体（Fluorescent antibody, FA）测试使用荧光显微镜来定位与固定在显微镜载玻片上的抗原结合的荧光标记抗体。由于可以通过显微镜观察到结果，这种方法相较于其他方法具有优势，因为可以清晰地看到抗原的大小和形状。但其缺点是该过程相对耗时，因为每个样本都需要使用荧光显微镜进行单独检查。酶联免疫吸附测定（ELISA）使用带有酶标记的抗体——换句话说，就是带有附着酶的抗体。用于标记抗体的酶中，一种常用的是来自辣根植物的过氧化物酶。为了检测这种酶，会使用比色测定法来测量无色底物在酶的作用下转化为有色产物的过程。与其他常见的免疫测定方法相比，这些测定方法具有易于操作和通常不需要高技术技能的优点。实际上，它们为几种简单的条带测试提供了基础，包括医生诊所中进行的快速 A 组链球菌检测以及非处方家用妊娠测试。Direct ELISA通常采用所谓的“夹心法”进行。在这种方法中，样本中的特定抗原被附着在孔内表面的抗体“捕获”；随后会检测这些捕获的抗原，并据此确定其身份。采用标记抗体进行间接酶联免疫吸附测定（Indirect ELISA）常用于筛查血液和血清中针对某些病原体的抗体。ELISA有时可能会产生假阳性结果，因此阳性结果通常会通过更可靠的测试（如免疫印迹法）来确认。涉及可见的抗原-抗体聚集体的免疫测定更灵敏的使用标记抗体。这些聚集的抗原-抗体复合物可以在凝集和沉淀反应中被观察到。这些反应用于红细胞分型以及识别某些类型的微生物。

Figure 1. Direct Enzyme-Linked Immunosorbent Assay (ELISA) (Derived from Anderson, D. G., Salm, S., & Beins M. (2022))

参考文献：

Anderson, D. G., Salm, S., & Beins M. (2022). Microbiology: A human perspective.