守护餐桌安全:非法拉第EIS传感器5 分钟锁定沙拉中的活鼠伤寒沙门氏菌

原创
来源:徐礼龙
2025-09-12 08:54:58
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核心提示:该研究开发的ZnO/Au 修饰的非法拉第 EIS 生物传感器可无标记、实时检测沙拉中的活鼠伤寒沙门氏菌,5 分钟内出结果且检测限低至 9 CFU/mL,能区分活菌与死菌以减少假阳性,经 ELISA、PCR 验证性能可靠,为现场食品安全监测提供高效工具。

全球食源性疾病已成为严峻的公共卫生挑战,世界卫生组织数据显示,每年因食源性致病菌引发的疾病达 6 亿例,42 万人因此死亡,美国每年约六分之一人口受污染食物或水影响。其中,鼠伤寒沙门氏菌作为常见且危害极大的革兰氏阴性人畜共患病菌,能在有氧与无氧环境中存活,以往多关联动物性食品,近年新鲜农产品(如沙拉、绿叶蔬菜)引发的感染暴发增多,且仅需 20-100 CFU 就可能致病,夏季(6-8 月)发病率更高,对婴幼儿、老年人等免疫力较低人群威胁更大,易引发败血症等严重并发症,因此快速精准检测食品中该菌至关重要。

当前主流检测方法存在明显局限。传统培养法虽准确,但需 5-7 天,依赖专业实验室与人员,无法实时干预;PCRLAMP 虽缩短时间,却需复杂样品前处理,常规方法难区分活菌死菌,结合特殊技术又增加操作复杂度;ELISA 则低浓度检测灵敏度不足,对人员技能要求高。而电化学传感器中,非法拉第 EIS 技术无需氧化还原探针,简化流程且适合现场检测,ZnO/Au 修饰电极能提升信号传导效率,为高性能传感器开发奠定基础。

1:展示基于 EIS 技术检测活鼠伤寒沙门氏菌的免疫测定构建方案示意图,呈现从污染沙拉样品到信号输出的检测流程

 

2:通过 ATR-FTIR 光谱、循环伏安图、显微镜图像及 ELISA 对比,表征 ZnO/Au 电极功能化过程并验证活菌与灭活菌的结合差异

美国德克萨斯大学达拉斯分校与 EnLiSense LLC 公司团队,开发出基于 ZnO/Au 修饰电极的非法拉第 EIS 生物传感器,首次实现食品中活鼠伤寒沙门氏菌无标记、实时、高特异性检测。传感器制备中,先在 PCB-FR4 基板制金工作电极并经 ENIG 处理,再用溶胶 - 凝胶旋涂法沉积 60-80 nm 多孔 ZnO 纳米薄膜,采用双电极配置含 16 个金工作电极,阵列式设计提升检测重复性。电极功能化关键是用 DTSSP 交联剂,将鼠伤寒沙门氏菌单克隆抗体固定于电极表面,经封闭、清洗、冻干后 4℃储存。

3:借助 Bode 图、Nyquist 图及柱状图,展示传感器 EIS 检测特性(低频区阻抗 - 浓度关系)与活菌选择性,附非法拉第 EIS 机制示意

实验验证中,选用活鼠伤寒沙门氏菌(ATCC 13311)为目标菌,大肠杆菌 O157:H7 为对照,模拟沙拉污染场景制备测试样品。通过 FTIRCV 等验证电极功能化有效性,Bode 图与 Nyquist 图显示传感器在 150-300 Hz 低频区能精准区分不同浓度活菌,检测限低至 9 CFU/mL5 分钟出结果。加标回收实验中,沙拉浸泡水基质回收率 100.34%-116.37%CV 6.35%-16.35%,低于 CLSI 20% 阈值;intra-assay inter-assay CV 均低于 10%,重复性良好;特异性实验中,活鼠伤寒沙门氏菌响应率显著高于其他菌,交叉反应性低。与 ELISA 对比,相关系数 r=0.98PCR 验证检测特异性,二元分类模型准确率 91.11%PPV 85.29%NPV 90.06%ROC 曲线 AUC 0.88,诊断效能优异。

4:呈现传感器在沙拉浸泡水中的阻抗响应、批内 / 批间重复性(% CV)及对鼠伤寒沙门氏菌的特异性,排除大肠杆菌干扰

 

5:通过与 ELISA 的相关性、PCR 验证、混淆矩阵及 ROC 曲线(AUC=0.88),证明传感器检测准确性与食品安全性分类能力

该传感器在实际应用中优势显著,适合食品加工厂、农贸市场等现场检测,可及时发现风险并干预,减少食源性疾病暴发。其模块化设计可扩展,更换抗体能检测其他致病菌,还可用于环境监测与临床诊断。需注意的是,相关作者在 EnLiSense LLC 有利益关联,但已通过学校审查,未影响研究。此传感器不仅突破食源性致病菌检测技术,还为公共健康与全球食品安全提供有力支撑,未来优化推广后,有望在食品安全监测体系及更多领域发挥关键作用。

参考文献:Karmakar S, Poudyal D, Mishra K K, et al. Label-Free Electrochemical Biosensor for Real-Time Detection of Live Salmonella typhimurium in Salad Samples Using Non-Faradaic EIS[J]. Biosensors and Bioelectronics, 2025: 117961.

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