三维风车形CAuNP:手性驱动的免疫层析高敏“猎手”
三维风车形CAuNP:手性驱动的免疫层析高敏“猎手”
即时检测(POCT)技术在医疗、环境和食品检测中需求迫切,免疫层析测定(LFIA)因简便、低成本成为实用POCT策略。传统金纳米颗粒(AuNPs)消光能力有限,影响低浓度靶标检测灵敏度。
尺寸工程和形状工程理论显示,大尺寸和特殊形貌AuNPs可增强光吸收,但大尺寸三维AuNPs制备复杂,形貌和尺寸均一性不足。手性等离子体纳米材料因螺旋结构和各向异性,具有优异局部表面等离子体共振(LSPR)和宽带光吸收能力,结合手性转移和尺寸工程,可通过高序等离子体模式、大尺寸偶极模式提升信号,且配体利于功能化。
然而,手性AuNPs在LFIA中应用罕见,大尺寸手性纳米材料制备面临尺寸与手性转移平衡难题。本研究首次将手性转移和尺寸工程结合,合成三维风车形CAuNPs并用于LFIA检测鼠伤寒沙门氏菌,以突破传统方法局限。
研究内容
图1.风车形CAuNPs的表征
采用种子生长法,以球形Au为籽晶制备立方AuNPs,再经L-谷胱甘肽(L-GSH)诱导合成风车形CAuNPs。其呈棕黑色,尺寸约110nm,表面有凹螺旋结构,凹角约113°。UV-可见光谱显示300-900nm宽带吸收,LSPR峰位于660nm。FT-IR证实L-GSH通过Au-S键结合,XPS和XRD表明为面心立方结构。圆二色谱显示手性特征,EDS元素分布均匀,证实CAuNPs成功合成且兼具手性和良好光学性能。
图2.L-GSH浓度对CAuNPs生长动力学的调控
L-GSH浓度通过影响沉积(V沉积)和扩散(V扩散)速率调控CAuNPs形貌。当AuNPs:L-GSH为1:0.30时,V沉积略大于V扩散,形成小凹角立方结构;1:0.61时,V沉积进一步增大,生成形貌均一的风车形结构;1:1.21时,V沉积远大于V扩散,出现树枝状不规则结构;1:2.43时发生聚集。DFT模拟显示L-GSH优先吸附于Au(111)晶面,结合热力学和动力学分析,证实L-GSH通过手性转移调控CAuNPs各向异性生长,1:0.61为最优比例。
图3.CAuNPs的性能评估
通过控制立方AuNPs籽晶量(10-50μL),制备50-110nm的CAuNPs,尺寸与籽晶量成反比,大尺寸CAuNPs凹角小、表面积大。UV-可见光谱显示大尺寸CAuNPs吸收更强,红移更明显,标准曲线斜率为AuNPs的1.4倍,光吸收能力更优。稳定性测试表明,CAuNPs在NaCl浓度>25×10⁻²M、pH3-11时性能稳定,优于传统AuNPs,得益于L-GSH表面官能团增强稳定性,适合LFIA应用。
图4.免疫探针的条件优化与性能评估
采用EDC/NHS法制备CAuNP-mAb免疫探针,优化后抗体用量6μg、探针体积8μL,均低于AuNP探针(12μg、12μL)。Zeta电位变化证实抗体成功偶联,ELISA检测显示CAuNPs抗体偶联效率(87.32%)和活性(92.99%)均高于AuNPs(75.09%、89.59%)。L-GSH的羧基通过共价键高效结合抗体,减少空间位阻,保留抗体活性,为高灵敏度检测奠定基础。
图5.基于CAuNPs构建的LFIA检测性能评估
CAuNP-LFIA检测鼠伤寒沙门氏菌,在鸡肉样品中10¹-10⁶CFU/mL浓度范围内,T线信号随浓度降低而减弱,目视检测限(vLOD)为10²CFU/mL,定量检测限(LOD)0.59×10²CFU/mL,分别比AuNP-LFIA低100倍和14.1倍。重复性实验RSD<2.26%,加标回收率89.46%-124.02%,特异性良好,仅对目标菌显色。20分钟完成检测,抗体用量少,性能优于多数已报道方法。
本研究结合手性转移和尺寸工程,以L-GSH为配体成功合成三维风车形CAuNPs,其具有均一形貌、宽带光吸收和良好稳定性,抗体偶联效率和活性高。基于此构建的LFIA平台检测鼠伤寒沙门氏菌,LOD达0.59×10²CFU/mL,LOD为10²CFU/mL,20分钟内完成检测,在鸡肉样品中表现出良好重复性、特异性和回收率,性能显著优于传统AuNP-LFIA。该方法为食品安全检测提供了高灵敏、快速的新策略,未来可拓展至其他生物标志物检测,通过研究更多手性配体进一步优化纳米材料性能。
原文链接:https://doi.org/10.1016/j.cej.2025.160079
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