16分钟读懂感染：三项血液指标帮你分清细菌还是病毒

原创

来源：邹晶晶

2026-03-19 15:53:10

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核心提示：细菌还是病毒？免洗AlphaLISA将抗体直连微球，16分钟仅用血清同步测CRP、MxA、SAA，灵敏稳定，与临床结果一致，助更快分诊用药。

炎症反应是机体应对病原体侵袭与组织损伤的关键过程，其强度与动态变化直接影响感染鉴别、慢性炎症管理及个体化治疗决策，因此对炎症标志物进行快速、准确检测具有重要临床意义。但在急诊和重症等时间敏感场景中，单一指标常难以可靠区分细菌与病毒感染，亟需多指标联合提高判断准确性。CRP、SAA与MxA具有互补价值：CRP更偏细菌感染升高，SAA在细菌和病毒感染中均可较早上升，MxA则对病毒感染更具特异性，三者联检可更好支持分诊与用药监测。现有ELISA、免疫比浊与化学发光等方法在耗时、样本量、抗干扰或多指标并行方面仍有不足，不利于快速检测与POCT。免洗均相AlphaLISA具备流程简化、检测时间可压缩至20 min内且易于多指标并行的优势，但上游微球功能化与试剂制备步骤仍较繁琐，限制临床推广。因此，本研究针对“试剂制备复杂”这一瓶颈，探索更简化的微球偶联策略（图1），并在此基础上构建CRP/MxA/SAA快速联检平台，为感染相关炎症的快速分型与高通量筛查提供更易落地的技术路径。

图1 AlphaLISA试剂制备两种策略的示意图。（A）为传统方案，先制备供体微球DMS与受体微球RMS，DMS需链霉亲和素化，RMS与抗体偶联，再用生物素化抗体作为桥梁连接DMS与RMS；商业微球常为醛基化，通过席夫碱形成并经NaBH3CN还原胺化实现抗体固定，步骤多且耗时。（B）为本文简化方案（Scheme II），采用羧基化DMS与RMS，利用EDC/NHS将抗体直接共价偶联形成酰胺键，DMS与RMS可在相同缓冲液和温度条件下同步偶联；随后由DMS-Ab1/抗原/RMS-Ab2形成稳定夹心复合物用于检测。

一、工作原理

AlphaLISA的“快”不仅在于免洗检测流程，更要把上游微球试剂制备做成更短、更统一、可并行的工程化流程，从而让多指标快速检测更易落地。检测原理与流程如图2所示：样本先与捕获微球RMSs-Ab2结合孵育8min，再加入供体微球DMSs-Ab1孵育8min，通过夹心复合物把两类微球拉近；在680nm激发下，DMS产生的单线态氧在约200nm范围内激活RMS上的发光体系，输出610nm信号，实现免洗定量。该流程仅需10–20μL血清，总用时16min。

图2 免洗AlphaLISA用于靶抗原检测的示意图。

二、性能分析

首先，在充分证明方法的特异性和稳定性之后，作者进一步对平台的定量性能与临床可用性进行系统评估。定量性能方面，三指标在宽浓度范围内呈良好线性，R²均>0.997；检出限分别为CRP 7.8μg/L、MxA 1.37μg/L、SAA 0.12mg/L（图3）。临床与应用指向方面，作者使用医院样本对CRP与SAA进行了对照验证，平台结果与参考方法高度一致，相关系数均超过0.998；MxA因缺乏常规对照条件，采用加标回收验证其分析准确性。与此同时，作者在机理层面给出解释：如图4所示，DMS产生的单线态氧触发RMS上Eu(III)体系的配体到金属能量转移，从而产生特征红光信号，并使信号强度随抗原浓度增加而增强。总体而言，本研究以并行共价偶联简化AlphaLISA关键试剂制备，同时保留免洗与高灵敏优势，实现16min完成CRP、MxA、SAA快速联合定量，并以特异性、稳定性、线性与临床一致性形成证据链，面向快速分诊与POCT具有明确转化价值。