基于Luminex微珠的高通量多重测定法鉴定奶牛乳腺炎六种主要病原菌

  乳腺炎是一种复杂的乳腺腺体多病因性疾病，对全球的奶业和畜牧业产生严重影响。同时，它还可能导致人类感染的病原体库增加，并增加治疗动物中的抗菌药物抗性。因此，准确鉴定导致乳腺炎的细菌物种对于成功的管理策略、快速干预和使用适当的治疗方法以及预防慢性病例至关重要。同时，对乳腺炎病原体的研究也是必不可少的。

  最近的研究着重于开发一种名为多重PCR-Luminex磁珠多重测定的方法，在单个样品中精确鉴定导致乳腺炎的六种细菌。这种方法具有高通量测试的能力，可以在几小时内对96个提取样品进行测试。通过使用已知浓度的ATCC菌株的DNA，该方法进行了优化，并分为三联组1和三联组2。

  多重PCR-Luminex磁珠多重测定方法使用了Luminex磁珠和多重PCR的结合。磁珠通过特定的探针与目标细菌的DNA结合，并通过流式细胞术对其进行检测。该方法的灵敏度类似于检测其他病原体的方法，每个反应中的LOD为10^6个拷贝数。此外，该方法还展示了对特定细菌的100%特异性，并且没有观察到交叉反应。

  此外，该方法还可以用于检测同时感染多种细菌的样品。在验证实验中，该方法成功地检测到了包含三联组1和三联组2细菌混合样品中的各个病原体，且重复性良好。

  多重PCR-Luminex磁珠多重测定方法的优势包括高通量、高灵敏度和特异性、同时检测多种菌株、可靠性和重复性以及低成本。然而，该方法仍然依赖于样品的准备和处理过程，并需要正确选择引物和探针的设计。另外，一些基质效应可能会对结果产生干扰，但可以通过稀释样品和添加额外的洗涤步骤来解决。

  总体而言，多重PCR-Luminex磁珠多重测定方法是一种快速、准确且可靠的乳腺炎细菌检测方法，对于有效管理和治疗乳腺炎具有重要意义。

  原文doi：10.3389/fcimb.2023.1125562