目前常用的幽门螺杆菌检测技术有哪些
原创 发布时间:2022-10-18 浏览次数: 3779 来源: 邝祖鹏

核心提示:幽门螺杆菌感染是导致胃癌的重要危险因素,世界卫生组织(WHO)已明确将其列为一级致癌物。幽门螺杆菌感染通常是在儿童时期获得的,1-10%的感染者可能出现临床并发症,包括消化性溃疡、胃萎缩、胃癌或粘膜相关淋巴组织肿瘤等。


  幽门螺杆菌感染是导致胃癌的重要危险因素,世界卫生组织(WHO)已明确将其列为一级致癌物。幽门螺杆菌感染通常是在儿童时期获得的,1-10%的感染者可能出现临床并发症,包括消化性溃疡、胃萎缩、胃癌或粘膜相关淋巴组织肿瘤等。因此,幽门螺杆菌的检测诊断技术发展是一项意义重大的工作。

  1.目前常用的幽门螺杆菌检测技术

  1.1.组织学诊断

  检测幽门螺杆菌比较常用的组织学方法主要包括Giemsa染色、H&E染色、W-S染色和免疫组化染色等。组织学诊断很依赖于诊断的人员的技术以及经验,这让诊断的结果存在一定的主观性。同时,组织切片标本的制备是否标准也会影响诊断,不标准的组织标本容易导致假阴性现象。

  1.2.快速尿素酶试验(RUT)

  RUT是最快速、方便、经济的一种侵入性检测方法。该方法基于幽门螺杆菌可产生活性很强的尿素酶,分解尿素产生NH3和CO2,通过试剂检验NH3确定是否有幽门螺杆菌感染。然而这种检测手段目前受到了学术界的质疑,因为诸多因素会导致RUT测试出现假阴性和假阳性的现象。其中,可能导致假阴性的原因包括:1、幽门螺杆菌在胃部分布的密度不均匀,胃镜取胃粘膜组织样本时难以控制,可能取样的微生物数量达不到检测的阈值;2、受质子泵抑制剂、H2受体拮抗剂、铋剂和抗生素等药物的影响导致假阴性;3、观察者的主观因素、观察时间、试剂质量、以及实验环境的湿度、温度都会影响结果。

  1.3.分离培养

  幽门螺杆菌由德国科学家在1875年首次在人体的胃中分离到,随后1982年澳大利亚科学家马歇尔证实了其主要生存于人类胃部及十二指肠的各区域内。由于其生长环境的特殊性,导致其在体外培养的条件下生长缓慢、对培养基营养成分及培养环境要求极为苛刻,是公认的难培养微生物。在胃检标本中分离培养幽门螺杆菌需要苛刻的实验室条件及操作技术,大量研究表明在粪便中分离培养该微生物的难度更大,因此该方法在临床上通常难以实施。

  1.4.分子生物学方法

  分子方法具有速度快和不受运输条件影响的优点。PCR方法在检测的灵敏度和特异性方面有较大的优势。利用PCR反应检测依赖于选择幽门螺杆菌中正确的、特异的基因以及据此设计出相应的、准确的引物。Clayton等人根据幽门螺杆菌的脲酶合成基因 ureA设计了检测引物,采用聚合酶链式反应方法了解胃内是否存在ureA 基因,从而判定胃粘膜是否存在幽门螺杆菌。而常用的基因也包括幽门螺杆菌的16srRNA、23srRNA、CagA、VacA、ureB、ureC 及 Hsp60等。而基于PCR的检测方法目前也面临着目标基因的特异性较差的挑战。而且分子生物学方法普遍依赖于PCR仪等实验设备,这对于在条件较落后的地区的实行幽门螺杆菌检测并不友好。

  1.5.尿素呼气试验

  尿素呼气试验是临床上应用最广泛的非侵入性检测方法。该方法同样利用幽门螺杆菌有活性很高的尿素酶这一特点,受试者口服13C或14C标记的尿素后可被其分解,产生的CO2经呼气排出,通过测定其呼出气体中标记CO2变化情况即可判断有无幽门螺杆菌感染。Petrovic等人使用14C标记的尿素胶囊评估塞尔维亚患者,结果表明,与组织学和活检相比较,尿素酶试验敏感性高(94.9%),特异性为100%。因此,一段时间以来,UBT一直被认为是无创检测的黄金标准。

  1.6.粪便抗原检测

  幽门螺杆菌在人体内定植于胃黏膜上皮细胞的表面,并随胃黏膜上皮细胞的快速更新、脱落而脱落,并随粪便排出,通过检测粪便抗原可了解有无幽门螺杆菌感染。幽门螺杆菌粪便抗原的检测是以抗原抗体特异性结合为基础,对抗体进行标记或显色的方法进行检测。尿素呼气试验具有最高的敏感性(90-96%)和特异性(88-98%),而基于酶联免疫分析的粪便抗原试验具有相似的准确性,两种方法可以替换使用。

  1.7.基于血清学的检测

  在人体血液中对幽门螺杆菌的IgG抗体进行检测是目前大部分医院在临床诊断上常用的手段之一。然而有研究表明不同的试剂盒对不同地区的人群的检测结果存在较大差异。在一项来自中国北方胃癌高发区庄河地区的大型比较研究中,Gong等人在7241例患者中将一款芬兰的诊断试剂盒(Hp-ELISA, Biohit Co)的血清学检测结果与传统组织学检测结果进行比对。结果发现使用这款试剂盒检测出的阳性率为42%,而组织学检测的阳性率达到70%,这在一定程度上说明了西方的幽门螺杆菌菌株开发的试剂盒不适用于远东地区。

  综上所述,幽门螺杆菌的准确诊断是开展其根除治疗的重要依据。如今存在的各种检测手段都存在着不同的优缺点,因此在临床上检测手段的使用应取决于患者的实际情况、地区差异性、样本的运输保存环境以及硬件设备条件等因素去选择某一种或多种检测手段。

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