37项食安国际征求意见核心盘点:霉菌计数/副溶血/金葡修订了什么?

近期，国家卫健委与市场监管总局同步公开了《食品安全国家标准 食品微生物学检验  霉菌和酵母计数》GB 4789.15-2016第1号修改单、新版《GB 4789.7 副溶血性弧菌检验》以及新版《GB 4789.10 金黄色葡萄球菌检验》三项食品安全国家标准征求意见文件。上述标准均已完成立项、实验室验证、行业征求意见，并通过了专业委员会审查。

本次核心修订紧密围绕“解决一线实操痛点、新增快速分子检测、扩充可选培养基与耗材、完善结果判定与报告规则、补充毒素检测”五大方向进行优化调整。各标准具体修订的核心专业技术点如下：

一、GB 4789.15-2016《霉菌和酵母计数》第1号修改单（征求意见稿）

1. 设备定义细化

原标准仅标注培养箱温度为 28 ℃±1 ℃，本次修订补充了设备类型，明确为恒温恒湿培养箱或霉菌培养箱，以统一实验室设备选型要求。

2. 修正平板培养方式（重大实操调整）

恢复倒置培养：2016版曾改为正置培养，但在实际落地中反馈平板易受污染且存在计数偏差。本次修订改回琼脂凝固后全程倒置培养，与1984—2010版旧国标及国际标准保持一致，实验验证表明倒置培养结果更为稳定。

规范观察流程：明确第3天进行首次观察记录，随后继续倒置培养至第5天进行二次计数；全程禁止开盖，并要求轻拿轻放。

新增实操备注：针对第3天出现菌落蔓延或数量过多的平板，要求装入自封袋密封后再放回培养箱，以避免交叉污染；二次观察时间可根据菌落生长情况灵活调整，但最晚不得超过第5天。

3. 统一结果报告规则

新增报告条款：若第3天与第5天两次计数因菌落蔓延出现数值不一致，直接选取两次结果中的较高数值出具报告，有效解决了蔓延菌落计数争议。

4. 文字勘误修正

将涂片章节中的“标准液”笔误更正为“样品稀释液”，消除了实际操作中的歧义。

二、新版 GB 4789.7《食品微生物学检验 副溶血性弧菌检验》（征求意见稿，替代2013版）

1. 检验方法体系拆分，双方法并行

原2013版将定性与MPN计数内容混杂，新版对流程进行了清晰拆分：

第一法：定性检验（判定样品是否检出副溶血性弧菌）。

第二法：MPN（最可能数）计数法（定量核算污染水平）。

2. 新增实时荧光PCR分子快速检测（核心新增技术）

增菌液可选PCR初筛：以 toxR 保守基因作为靶标，搭配 pUC19 质粒作为内参。初筛阴性可直接出具未检出报告，大幅缩短检测周期。

菌落确认新增PCR法：在生化鉴定与荧光PCR之间提供二选一的确认方式。

致病性分型检测：增加 tdh 耐热溶血毒素基因荧光PCR检测，以区分致病与非致病菌株，匹配食物中毒溯源需求。

完整配套PCR体系：明确了引物探针序列、25 μL反应体系、扩增程序、阴/阳/空白对照设置及Ct值判定阈值。

3. 全流程优化设备、培养基与操作细节

更新设备清单：补充了实时荧光PCR仪、离心机、微量可调移液器、金属浴等分子检测配套设备。

标准化培养基配方：完善了3%氯化钠碱性蛋白胨水、TCBS琼脂、三糖铁、嗜盐试验、我妻氏血琼脂等全套培养基的成分、灭菌条件及pH控制。

细化样品前处理：明确冷冻样品在 7 ℃~10 ℃下解冻时间≤18 h，均质与增菌温度统一为 36 ℃±1 ℃，增菌时长为 8 h~18 h。

完善生化鉴定表：准确区分副溶血性弧菌与创伤弧菌、溶藻弧菌、霍乱弧菌等近缘菌种的生化特征。

4. 补充可选致病性与血清学分型试验

神奈川溶血试验：通过我妻氏血琼脂 β 溶血反应，关联评估菌株的致病能力。

O/K抗原血清分型：标准化菌悬液制备与玻片凝集判定规则，用于暴发溯源时的菌株分型。

5. 配套标准化MPN检索附录

独立设置副溶血性弧菌专用MPN表，明确不同稀释度数值换算规则，统一定量结果计算逻辑。

三、新版 GB 4789.10《食品微生物学检验 金黄色葡萄球菌检验》（征求意见稿，替代2016版）

1. 三大检验方法划分，适配不同污染浓度样品

第一法：定性检验。

第二法：平板计数（适合高污染样品）。

第三法：MPN计数（适合低污染样品）。

2. 扩充选择性培养基与快速耗材，降低检测门槛

新增显色平板：将金黄色葡萄球菌显色平板作为 Baird-Parker 平板的替代选择，经验证其选择性与灵敏度无显著差异，且菌落颜色辨识度更高。

新增测试片：第二法计数新增金黄色葡萄球菌测试片，简化涂布操作，可直接替代琼脂平板开展计数。

3. 完善菌落形态判定标准，解决判定模糊问题

细化了 Baird-Parker 平板在 24 h 和 48 h 不同培养时长下的菌落特征；补充了冷冻/脱水食品分离出的浅色系、粗糙可疑菌落的描述；同步明确了血琼脂、显色平板的典型菌落形态，以减少人员判定误差。

4. 新增葡萄球菌肠毒素全套检测（重大增补）

新增附录B肠毒素检测：涵盖样品毒素提取、ELISA定性及 A-E 分型检测。

优化提取工艺：采用“酸化-中和-PEG透析浓缩”工艺，提升食品基质中毒素的提取效率。

新增全自动免疫荧光分析系统检测方法：与传统 ELISA 灵敏度相当，且自动化程度更高。

明确判定标准：确立了结果判定临界值与内源性过氧化物酶干扰排除方案，统一了毒素检出报告话术。

5. 完善质量控制与计算规则

明确质控要求：规定了标准参考菌株及阴阳性对照菌株的使用要求，补齐了原标准的质控空白。

修正计算逻辑：平板计数新增计算公式，区分典型与可疑菌落的阳性检出比例，修正了多稀释度结果核算逻辑。

6. 配套专属MPN检索附录：统一了低污染样品的定量报告规范。

四、三项标准共性修订核心思路

接轨国际标准：参考 ISO、AOAC、美国 FDA BAM 等国际方法，引入荧光PCR、显色培养基、快速测试片等国际通用技术。

解决一线实操痛点：修正原标准中易污染、菌落判定模糊、文字错误、计数结果争议等实验室高频问题。

兼顾传统与快速检测：保留生化、平板、MPN等经典方法，同步新增分子、免疫快速检测，实验室可按需选择。

强化食品安全溯源能力：新增副溶血性弧菌 tdh 致病基因、金黄色葡萄球菌肠毒素检测，支撑食物中毒风险研判。

统一方法验证要求：全部通过5家实验室间比对，指标符合《GB 4789.45-2023 微生物方法验证通则》，确保方法的稳定性与重复性达标。

五、征求意见阶段说明

上述三项文件均已完成立项、内部试验、多机构实验室验证及行业预征求意见，无重大分歧。经国标审评委员会微生物专业分会审查通过后，现公开征求社会意见。正式发布后，将替代现行旧版标准或发布修改单，全国食品生产企业、第三方检测机构及监管实验室将统一执行。

六、对企业/检测机构的启发

1．建议采用预制的干粉或即用型成品培养基，可确保培养基性能高度一致，为方法验证和日常检测提供稳定可靠的“基准线”，有效规避自配带来的质量风险。

2．为确保阴阳性对照可靠，满足标准对实验室质量控制的合规性要求，实验室应采用来源清晰、活性有保证的商业质控菌株。

3．副溶血性弧菌的实时荧光PCR快速筛查与致病基因（tdh）分型对实验室的分子检测能力提出了新要求。使用配套优化的即用型PCR预混液和核酸提取试剂盒，可以简化实验操作，减少人为误差，确保扩增效率和检测灵敏度，帮助实验室快速建立并稳定运行新的分子检测项目，满足食源性疾病的精准溯源需求。

参考文献

1. GB 4789.15-2016《食品安全国家标准 食品微生物学检验 霉菌和酵母计数》第1号修改单（征求意见稿）

2. GB 4789.7-2013《食品安全国家标准 食品微生物学检验 副溶血性弧菌检验》及新版征求意见稿

3. GB 4789.10-2016《食品安全国家标准 食品微生物学检验 金黄色葡萄球菌检验》及新版征求意见稿

4. GB 4789.45-2023《食品安全国家标准 微生物检验方法验证通则》

5. ISO 21527-1:2008, ISO 21527-2:2008 Microbiology of food and animal feeding stuffs - Horizontal method for the enumeration of yeasts and moulds

6. ISO 21872-1:2017 Microbiology of the food chain - Horizontal method for the determination of Vibrio spp.

7. FDA BAM Chapter 9: Vibrio; Chapter 18: Yeasts, Molds and Mycotoxins

8. AOAC Official Method 2014.05, 997.02