1.主题内容与适用范围

  本方法规定了压力蒸汽灭菌技术标准及其评价灭菌效果的检测方法。

  本方法适用于对压力蒸汽灭菌效果的评价。

  2.试剂

  本标准所用试剂,凡未说明规格者,均为分析纯(AR),水为蒸馏水。

  2.1 蛋白胨

  2.2 葡萄糖

  2.3 溴甲酚紫酒精溶液:取溴甲酚紫2.0g,溶于100mL95%乙醇中。

  2.4 溴甲酚紫蛋白胨水培养基配制;蛋白胨10.0g,葡萄糖5.0g,溶于1000mL蒸馏水中,调pH值至7.0~7.2,然后再加2%溴甲酚紫酒精溶液0.6mL,摇匀后,按5mL/管,分装包口,置压力蒸汽灭菌器中,于115℃灭菌40min后备用。

  3.指示菌

  嗜热脂肪杆菌芽胞(ATCC7953或SSI K31)菌片,含菌量为5×105~5x106/片,121℃下,杀灭90%微生物所需时间D121值为1.3~1.9min、杀灭时间(KT值)为≤19mm，存活时间(ST值)为≥3. 9min。

  4.化学指示剂

  需用卫生部批准的化学指示剂

  5.技术要求

  6.检测方法

  6.1 生物学指标(用作压力蒸汽灭菌设备灭菌效果的依据)。

  6.1.1 将嗜热脂肪杆芽胞菌片两个分别放入灭菌小纸袋内,置于标准试验包中心部位。

  6.1.2 灭菌柜室内,上、中层中央和排气口处各放置一个标准试验包(由3件平纹长袖手术衣,4块小手术巾,2块中手术巾,1块大手术巾，30块10cm×10cm、8层纱布敷料包裹成25cmx30cmX30cm大小)。手提压力蒸汽灭器用通气贮物盒(2cm×13cm×6cm)代替标准试验包,盒内盛满中试管,指示菌片放于中心部位两只灭菌试管内(试管口用灭菌牛皮纸包封),将盒平放于手提压力蒸汽灭菌器底部。

  6.1.3 经一个灭菌周期后，在无菌条件下，取出标准试验包或通气贮物盒中的指示菌片,投入溴甲酚紫葡萄糖蛋白胨水培养基中,56℃培养48h,观察培养基颜色变化。

  6.2 化学指标

  在物品包外用化学指示胶带,可作为物品是否经过灭菌的处理标志,在物品包内中心部位用化学指示剂,可作为物品是否灭菌的参考标志。

  7.结果判定及评价

  7.1 同次检测中,标准试验包或通气贮物盒内,每个指示菌片接种的溴甲酚紫蛋白胨水培养基全部不变色,判定为灭菌合格。指示菌片之一接种的溴甲酚紫蛋白胨水培养基由紫色变为黄色时,判定为灭菌不合格。

  7.2 化学指示剂的颜色变为与灭菌合格标准色相同时,或熔化时作为灭菌合格的参考标准。