核心提示：人类诺如病毒(HuNoVs)具有很高的传染性，主要通过人与人之间的直接接触或受污染的食物或水通过粪便-口腔途径传播;这往往导致在封闭或半封闭的社区和机构爆发大规模疫情。

  诺如病毒(NoV)是一种主要的肠道病原体，因在全球范围内引起人类急性胃肠炎而臭名昭著。人类诺如病毒(HuNoVs)具有很高的传染性，主要通过人与人之间的直接接触或受污染的食物或水通过粪便-口腔途径传播;这往往导致在封闭或半封闭的社区和机构爆发大规模疫情。NoV感染已被认为是一个重要的公共卫生问题，特别是在儿童和老年人中。据估计，每年全球有超过6.84亿例病例和20万人死亡。考虑到巨大的疾病负担和控制HuNoVs的难度，需要开发一种有效的疫苗。

  到目前为止，由于缺乏有效的体外培养系统和动物模型，对NoV的研究一直不足。这阻碍了NoV疫苗的开发，大多数疫苗仍处于临床前或临床开发阶段。目前的努力主要集中在发展病毒样颗粒(VLP)疫苗和表达NoV.VP1蛋白的复制缺陷型腺病毒5(Ad5)载体疫苗。Ad5载体因其高水平的基因表达、广泛的细胞趋向性以及易于操作和生产而被广泛应用于疫苗开发。

  然而，基于Ad5的疫苗应用的一个主要障碍是对Ad5载体的预先存在的免疫，这可能会降低携带外源基因的载体的免疫效力。RIG-I是RIG-I样受体(RLR)家族的成员之一，表达于所有类型的细胞质中。它主要识别带有5‘-三磷酸(5’-PPP)的短双链RNA(dsRNA)。由dsRNA激活的RIG-I通过激活线粒体抗病毒信号蛋白诱导I型干扰素(干扰素)和促炎细胞因子的表达，从而引发适应性免疫反应。体外合成的5‘-PPP dsRNA与流感疫苗一起用作佐剂，提高了流感病毒的特异性抗体水平。5‘-PPP dsRNA也被测试为DNA疫苗的内置佐剂;与目标基因的共表达诱导了强烈的免疫反应。研究表明，5‘-PPP dsRNA能够显著提高疫苗效力，使其成为一种有吸引力的疫苗佐剂候选。

  研究设计了两个短的dsRNA分子，命名为DS1和DS2，并将其作为RIG-I受体激动剂导入腺病毒载体，由U6启动子启动表达。dsRNA产物可能保留5‘-三磷酸(5’-PPP)，这是激活RIG-I受体所必需的。在体外检测了新基因重组腺病毒5(RAd5)疫苗感染的HEK293和A549细胞中VP1蛋白的表达水平，并通过检测免疫后不同免疫阶段的IgA、Ig G和阻断抗体，以及免疫终点细胞因子水平、抗体分泌细胞(ASCs)和记忆B细胞的比例来评价口服疫苗的效果。

  图一 表达NoV VP1和dsRNA佐剂的重组腺病毒的示意图

  研究表明Nov-rAd5疫苗与RIG-I激动剂共表达诱导了令人满意的免疫应答。尽管没有直接证据证实内置dsRNA佐剂的作用机制，但现有的研究表明，由U6启动子启动的内置dsRNA佐剂通过RIG-I受体信号通路促进干扰素的表达和分泌。对于口服NoV-rAd5疫苗，内置dsRNA最显著的作用是增加肠粘膜SIgA的水平，它比IgG具有更多的中和潜力和对异源病毒的交叉保护。此外，DS1和DS2之间在免疫刺激活性方面没有显著差异，这表明dsRNA对NoV-rAd5疫苗的影响可能不是长久的。

  参考文献：

  [1] Wang J, Ma Y, Li J, Peng R, Mao T, Sun X, Duan Z. An oral NoV-rAd5 vaccine with built-in dsRNA adjuvant elicits systemic immune responses in mice. Int Immunopharmacol. 2023 Mar;116:109801.