DNA和ATP协同触发Argonaute介导的传感器用于超灵敏检测活沙门氏菌而无需DNA提取和扩增

噬菌体辅助的DNA和ATP协同触发Argonaute介导的荧光（PDAAF）平台，用于活沙门氏菌的超灵敏检测。

在这项工作中，噬菌体可以特异性地识别并裂解活沙门氏菌以释放DNA和ATP（图1A）。首先，我们设计了一种ATP二价适体，它由5'端带有修饰的磷酸基团的gDNA和2个生物素-ATP适体组成，并通过生物素-链霉亲和素系统将其偶联到磁性颗粒上构建了MNP-BAPT（图1B）。然后，我们设计了三种gDNA结合PfAgo以识别沙门氏菌DNA，并且将短链DNA精确切割为二级gDNA，再次与未负载的PfAgo切割荧光探针组合，以实现PfAgo的两步切割能力（图1C）。 当样品中存在沙门氏菌时，我们构建的MNP-噬菌体能够识别并捕获它，并使用磁性分离将其从样品中分离出来。噬菌体只能裂解活的沙门氏菌，释放DNA和ATP。当ATP存在时，MNP-BAPT优先结合ATP并释放gDNA。磁性分离后，上清液中的gDNA与PfAgo组装，识别并切割FQ荧光探针链，产生荧光信号。接下来，通过添加为沙门氏菌DNA设计的三条gDNA链，他们能够结合PfAgo以识别沙门氏菌DNA，并实现FQ荧光探针的两步切割以产生荧光信号。我们同时收集了两种途径产生的荧光信号，实现了信号增强（图1D）。 DNA和ATP在单个管中协同触发荧光探针切割两次，有效地提高了PDAAF生物传感器的灵敏度，其可以在不提取或扩增DNA的情况下检测活细菌。据我们所知，这是第一次报告的扩增免费PfAgo介导的生物传感器和增强系统的基础上的DNA和ATP协同触发双荧光信号检测活沙门氏菌。本工作为通过简单地更换识别元件来检测各种活的食源性病原体提供了广泛的应用前景。

图 1 用于检测活沙门氏菌的PDAAF生物传感器的示意图。(A) 噬菌体感染和活沙门氏菌裂解的过程。(B)MNP-BAPT复合物的构建和ATP的识别。(C) PfAgo的两步裂解能力。(D) 用PDAAF生物传感器检测活沙门氏菌。

参考文献：DNA and ATP synergistically triggered Argonaute-mediated sensor for the ultrasensitive detection of viable Salmonella without DNA extraction and amplification.