基于目标细菌 DNA 的 Taqman qPCR 可能会产生假阳性结果，有时当细菌死亡但核酸尚未完全降解时。基于噬菌体 DNA 直接检测的 Taqman qPCR 检测可以减少这种假阳性结果，因为噬菌体仅通过活的宿主细菌繁殖。特别是对于服药的患者，该方法允许识别活菌可以帮助患者及时调整剂量。该方法也可用于细菌敏感性检测，因为当细菌和抗生素共孵育 1 或 2 小时时，药物敏感和耐药细菌的活菌量会有所不同。否则，该方法为在制备新鲜噬菌体溶液和监测噬菌体治疗中的噬菌体量变化时快速准确地进行噬菌体计数提供了思路。

文章主要的检测流程如图1所示，文章主要评价了对新鲜制备的噬菌体溶液计数的测定的准确性和稳定性。然后，使用的加标拭子/支气管肺泡灌洗液样本比血流更复杂。此外，作者扩大了噬菌体和细菌的共培养体积，进一步提高了检测下限。该系统应用于加标拭子/支气管肺泡灌洗液样本中活的鲍曼不动杆菌的无创检测。时间点 0 h 和 3 h 之间的 Ct 变化表明标本中是否存在鲍曼不动杆菌。通过将噬菌体和细菌的培养体积调节至 1 mL，拭子/支气管肺泡灌洗液样品中细菌的检出限可达到 1 log CFU/mL。与靶向鲍曼不动杆菌保守基因的 Taqman qPCR 相比，本研究中构建的检测方法的灵敏度可以提高四个数量级。整个测定可在 4 小时内完成。总而言之，评估了一种基于直接噬菌体 DNA 检测的 Taqman qPCR 方法，用于从加标拭子和支气管肺泡灌洗液样品中定量噬菌体和快速超灵敏鉴定宿主细菌 （A.baumannii）。

图1 基于直接噬菌体 DNA 检测的噬菌体定量 Taqman qPCR 方法示意图及其在宿主细菌鉴定中的应用

参考文献：

Evaluation of a direct phage DNA detection-based Taqman qPCR methodology for quantification of phage and its application in rapid ultrasensitive identification of Acinetobacter baumannii.