基于噬菌体尾刺蛋白修饰的金纳米颗粒结合智能手机:用于快速细菌检测与光热杀菌
基于噬菌体尾刺蛋白修饰的金纳米颗粒结合智能手机:用于快速细菌检测与光热杀菌
噬菌体尾刺蛋白修饰金纳米颗粒的检测机制:
金纳米颗粒(AuNPs)因其独特的表面等离子体共振(SPR)效应、易于合成、表面修饰方便以及良好的生物相容性,在快速可视化传感领域备受关注。在本研究中,通过将噬菌体尾刺蛋白(TSP)与AuNPs结合,制备了AuNPs@TSP复合物。TSP作为一种分子识别单元,具有高特异性、强抗干扰能力、稳定性好且易于通过重组表达获得等优点。当AuNPs@TSP与沙门氏菌结合时,由于AuNPs@TSP在沙门氏菌表面的聚集,会导致溶液颜色发生变化,同时在近红外光照射下,AuNPs@TSP能够将光能转化为热能,实现对沙门氏菌的光热杀菌。
噬菌体尾刺蛋白的特异性识别:
噬菌体尾刺蛋白(TSP)在噬菌体粒子组装的最后阶段,其尾部集线器连接到尾刺上,尾刺由六个三聚体gp9分子组成,这些尾刺在特异性结合病毒受体——沙门氏菌脂多糖(LPS)中的重复O-抗原碳水化合物结构中起着关键作用。TSP的N端颗粒结合域(PBD)负责将延长的分子结合到噬菌体头部,而较大的C端部分作为受体结合域(RBD),负责介导与宿主受体的结合。在本研究中,TSP的RBD(121-667 aa)被结合到AuNPs表面,实现了对沙门氏菌的特异性识别。
沙门氏菌的实际样品检测:
评估了该检测方法在牛奶样品中检测沙门氏菌的适用性,包括直接分析和加标实验。通过TSP-MBs在20分钟内特异性分离和富集沙门氏菌,然后在30分钟内通过AuNPs@TSP进行检测,整个检测过程仅需50分钟。在加标实际样品中,回收率在90.0%到99.8%之间,最大相对标准偏差(RSD)为5.11%,显示出高可靠性和准确性。这表明TSP-MBs分离和AuNPs@TSP检测的生物测定法具有快速响应、操作简便、灵敏度高和选择性好的特点。
沙门氏菌的光热消融:
本研究考察了TSP修饰的AuNPs对沙门氏菌(2×10⁵ CFU/mL)的光热活性。在AuNPs@TSP与沙门氏菌结合后,使用808 nm激光对沙门氏菌细胞进行NIR处理。通过扫描电子显微镜(SEM)技术监测NIR处理后沙门氏菌的形态变化,结果显示,在NIR照射2分钟后,沙门氏菌出现轻微损伤,而在4分钟和6分钟后,由于细胞膜的破坏,细胞破裂变得严重。将经过NIR处理的溶液涂布在琼脂平板上,评估细菌的存活率,结果显示,随着NIR处理时间的增加,细菌的存活率逐渐降低,在第六分钟时全部死亡。通过热成像相机可视化NIR光照射区域的热分布,生成温度分布图。光热图像分析显示,NIR光照射导致温度从27.9℃升高到66.2℃,进一步证实了AuNPs@TSP由于温度升高和细胞膜破坏而展现出显著的抗菌特性
关键发现:
1. 开发的“感知-治疗”型生物传感器,利用AuNPs@TSP结合智能手机,快速检测并光热杀灭沙门氏菌,50分钟内出结果,检测限低,杀菌效率高。
2. TSP作为识别单元,特异性结合沙门氏菌LPS,使AuNPs@TSP在细菌表面聚集,引发颜色变化,实现特异性检测,与其他细菌无交叉反应。
3. AuNPs@TSP在808 nm激光照射下,高效转化光能为热能,破坏沙门氏菌细胞膜,6分钟内细菌全灭,温度升至66.2℃。
结论:将噬菌体尾刺蛋白(TSP)与金纳米颗粒(AuNPs)结合,并利用智能手机实现的这种生物传感器,能够灵敏、快速、特异性地检测沙门氏菌。此外,AuNPs@TSP展现出光热杀菌特性,能够高效地消灭细菌。该研究提供了一种基于AuNPs@TSP在沙门氏菌表面聚集的比色检测方法,实现了对沙门氏菌的快速、灵敏检测,检测结果可通过智能手机应用程序方便地显示,整个检测过程仅需50分钟,检测限为2.53×10³ CFU/mL。
参考来源:
Hong B, Qin T, Wang W, et al. Phage tailspike protein coated gold nanoparticles combined with smartphone for rapid bacterial detection and photothermal sterilization[J]. Talanta, 2024, 276: 126268.
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