意大利成功研发猪脑心肌炎自体疫苗，田间试验保护5050头猪无一发病

一、研究背景与问题

猪脑心肌炎（Encephalomyocarditis, EMC）是一种由啮齿动物传播的人畜共患疾病，猪群尤其易感，可导致仔猪急性死亡和母猪繁殖障碍。EMC病毒（EMCV）属于小RNA病毒科心病毒属，对环境抵抗力强，可在农场中持续存在。自20世纪80年代首次在意大利暴发以来，EMCV已成为该国北部地区（如伦巴第、艾米利亚-罗马涅）的地方性流行疫病，近年来血清阳性率持续上升，在某些种猪场甚至高达84%。

目前美国有商业化EMCV疫苗，但欧洲市场尚无可用产品，疫情控制依赖生物安全与啮齿动物防控，效果有限。根据意大利法规（Legislative Decree No. 287/94），在无注册疫苗可用的情况下，允许政府授权的动物预防研究所（Istituti Zooprofilattici Sperimentali）为特定农场紧急生产“自体疫苗”（autogenous vaccine）。本研究即针对2025年布雷西亚省一猪场暴发的高死亡率疫情，开展疫苗研发与应用。

二、研究方法：从毒株分离到疫苗制备

疫情调查与病毒分离

疫情发生于存栏800头母猪和后备母猪的种猪场，初期后备母猪突发死亡（120头），数月后出现母猪流产和弱仔。对10头死亡仔猪剖检均发现心肌多发性白色病灶，取样后经实时RT-PCR检测为EMCV阳性（靶向3D基因），随后通过接种VERO和MARC-145细胞分离到病毒毒株。

疫苗制备工艺

采用BHK-38和BHK-21细胞系扩增病毒，流程主要包括（见图1）：

病毒扩增：接种滴度为10⁶ TCID₅₀/mL的病毒液，培养至出现明显细胞病变（CPE），收获病毒液滴定达10⁸^·⁵ TCID₅₀/mL；

灭活处理：使用BEI（二进制乙烯亚胺）按1:33比例在26℃处理48小时，彻底灭活病毒；

佐剂配制：添加30%氢氧化铝佐剂增强免疫原性；

无菌与安全检验：按欧洲药典标准进行无菌试验，并接种小鼠和SPF猪评估安全性。

免疫与效果评价

实验室评价：4头SPF猪肌肉接种2剂疫苗（间隔21天），34天后检测抗体；

田间试验：在两座曾有EMCV季节性暴发的育肥场，先对20头哨兵猪免疫观察，再对全场5050头猪实施免疫，持续观察至育肥期末（9月龄）。

三、研究结果：安全有效，田间保护率100%

疫苗安全性与免疫原性

无菌试验合格，无细菌污染；小鼠接种后无不良反应；SPF猪接种后无局部或全身副作用；抗体检测显示（见表1），4头免疫猪中2头血清阳性（竞争抑制率≥80%），1头弱阳性，1头阴性，表明疫苗可激发体液免疫。

田间应用效果显著

5050头免疫猪在整个育肥期（约9个月）内无EMCV相关临床症状或死亡；既往该两农场在秋冬季节常发疫情，本次免疫后即使引入新批次猪群也未出现复发，提示疫苗具有持续保护力。

工艺与毒株匹配性保障有效性

使用本地流行毒株制备疫苗，确保了抗原匹配性；BEI灭活兼顾病毒抗原结构完整性与安全性；氢氧化铝佐剂有效增强免疫应答。

四、结论与展望：自体疫苗填补防控空白

本研究成功开发出首个针对意大利EMCV流行毒株的自体灭活疫苗，并证实其安全性、免疫原性和田间有效性。自体疫苗在商业化疫苗缺位的情况下，为地方性疫病提供了快速响应解决方案，尤其适用于毒株变异频繁或疫情局限的场景。

未来研究方向包括：优化抗原剂量与佐剂配方，提升抗体阳转率；长期监测免疫猪群的抗体动态与保护持久性；探索EMCV在野生动物-家猪间的传播机制，助力源头控制。此疫苗不仅可降低养猪业经济损失，还通过减少抗生素使用对抗菌药物耐药性和环境污染具有积极意义。

参考来源：

Tenuzzo, Miriam et al. “Development of an autogenous vaccine against encephalomyocarditis in pigs.” Vaccine, vol. 61 127417. 26 Jun. 2025, doi:10.1016/j.vaccine.2025.127417