警惕！禽流感疫苗加头孢噻呋，竟让鸡抗体水平下降还引发肠道菌群紊乱？

研究背景

高致病性禽流感（HPAI）如H5N1、H7N9可致家禽急性死亡，还能传染人，我国采用“扑杀+免疫”防控，灭活油佐剂禽流感疫苗因高效、安全、易量产被广泛使用。但家禽接种时，外源抗原、疫苗佐剂等可能引发注射部位应激和炎症，因此超80%鸡场会将抗生素与疫苗联用，其中头孢噻呋（第三代头孢类兽用抗生素）最常用。然而，头孢噻呋可能影响疫苗稳定性和免疫效果，还可能改变家禽肠道菌群，此前关于其对禽流感疫苗结构、家禽免疫应答及肠道微生物影响的研究较少，故开展本研究以评估头孢噻呋对疫苗特性及雏鸡健康的影响。

研究方法

研究首先进行疫苗与抗生素的准备及稳定性测试，选用重组H5+H7三价油乳剂灭活禽流感疫苗（包含H5N6、H5N8、H7N9菌株），以及头孢噻呋钠（水溶性，规格1g/支）和头孢噻呋盐酸盐油乳剂（油溶性，规格50 mg/mL）两种市面上常用剂型。将头孢噻呋钠溶解为50 mg/mL的溶液，与头孢噻呋盐酸盐油乳剂分别按照疫苗体积的2%、4%、8%、12%、16%、20%比例混入疫苗中，以3000 rpm的转速振荡5分钟，同时设置仅含疫苗的对照组；通过离心破乳法（3000 rpm离心15分钟）观察混合物是否分层以评估W/O结构稳定性，并用200倍光学显微镜观察油乳颗粒形态，记录混合物颜色、质地等外观变化。

接着开展动物实验设计，将240只2日龄的SPF雏鸡饲养至20日龄后，随机分为4组，每组60只，设置6个重复，每个重复10只雏鸡，4组分别为对照组（注射0.5 mL生理盐水）、疫苗组（仅注射0.5 mL疫苗）、疫苗+头孢噻呋钠组（注射0.5 mL疫苗+2mg头孢噻呋钠）、疫苗+头孢噻呋盐酸盐组（注射0.5 mL疫苗+2 mg头孢噻呋盐酸盐），并在20日龄时通过颈部皮下注射、35日龄时通过胸部肌肉注射进行免疫。

最后确定检测指标与分析方式，在实验过程中，测定雏鸡20日龄、35日龄、50日龄时的体重及总增重；每次免疫后15天（35日龄、50日龄）每组解剖10只雏鸡，按0-3分制评估注射部位吸收情况；免疫后2小时、6小时采集血清，用LC-MS/MS法检测头孢噻呋浓度；35日龄、50日龄采集血清，通过血凝抑制试验测H5N8、H7N9抗体效价；40日龄采集血清，检测生化指标（MDA、LDH等）和免疫指标（IgY、IL-2等）；40日龄采集新鲜粪便，提取基因组DNA后进行16S rRNA高通量测序分析肠道菌群；使用SPSS 16.0统计数据，GraphPad 8绘制图表。

研究结果

疫苗与头孢噻呋混合稳定性差，且不同剂型对疫苗结构影响不同。所有浓度的混合物经离心后均出现分层，随抗生素浓度升高，混合物颜色从乳白色逐渐加深。显微镜观察显示，头孢噻呋钠仅使疫苗形成异质性囊泡颗粒，高浓度也未破坏W/O结构；而头孢噻呋盐酸盐在浓度≥8%时，会彻底破坏W/O结构，形成聚集块状物（图1）。同时，加入头孢噻呋会导致疫苗注射部位吸收不良，疫苗组颈部皮下、胸部肌肉注射吸收评分分别为0.3、0.8，加入头孢噻呋后评分显著升高，其中疫苗+头孢噻呋盐酸盐组评分最高（皮下2.4、肌肉2.6），解剖可见未吸收油乳块（图2）。

头孢噻呋盐酸盐会显著降低雏鸡抗体效价，而血清药物浓度未受疫苗影响。首免后（35日龄），疫苗+头孢噻呋盐酸盐组H5N8（22.36）、H7N9（23.36）抗体效价显著低于疫苗组（H5N8 24.15、H7N9 24.64）（p<0.05）；二免后（50日龄），该组H7N9抗体效价（27.85）仍显著低于疫苗组（29.38）（p<0.01），疫苗+头孢噻呋钠组与疫苗组无差异（图3）。血清药物浓度方面，免疫后2小时、6小时，疫苗+头孢噻呋组与对应抗生素对照组浓度无显著差异（p>0.05），仅2小时时头孢噻呋钠组浓度（649.91 ng/mL）略高于盐酸盐组（491.65 ng/mL）（图4）。

头孢噻呋对雏鸡生长性能有一定积极影响，但会导致生化与免疫指标异常。35日龄、50日龄时对照组体重显著高于所有免疫组（p<0.05）；50日龄时，疫苗+头孢噻呋钠组体重（360.93 g）显著高于疫苗组（334.79g）（p<0.05），总增重（220.00 g）也高于疫苗组（195.72 g），盐酸盐组与疫苗组无差异。生化指标上，各免疫组血清应激指标MDA、LDH显著高于对照组（p<0.05），且头孢噻呋组高于疫苗组；抗氧化指标SOD、CAT、T-AOC显著低于对照组和疫苗组（p<0.05）。免疫指标上，疫苗+头孢噻呋钠组IgY显著高于对照组和疫苗组（p<0.05），各免疫组IL-2升高、IL-6及TNF-α降低，头孢噻呋组INF-γ低于疫苗组（p<0.05）（图5）。

疫苗会改变雏鸡肠道菌群结构，头孢噻呋可部分恢复但剂型差异显著。疫苗组ASV数量、Alpha多样性（Ace、Shannon指数）显著低于对照组（p<0.05），加入头孢噻呋后多样性回升，且疫苗+头孢噻呋钠组ASV数量显著高于疫苗组（p<0.05）（图6）。门水平上，疫苗+头孢噻呋钠组厚壁菌门占比（57.15%）高于对照组（52.68%）和疫苗组（54.24%），盐酸盐组变形菌门占比（25.64%）高于对照组（22.79%）。属水平上，疫苗组有益菌乳酸杆菌、Muribaculaceae丰度降低，有害菌拟杆菌、真杆菌属升高（p<0.01）；头孢噻呋钠组埃希氏菌-志贺氏菌丰度低于疫苗组（p<0.001），盐酸盐组则升高（p<0.001）（图7）。功能预测显示，疫苗组膜运输、氨基酸代谢等通路丰度降低，头孢噻呋可使其恢复（图8）。

结论与展望

本研究表明，头孢噻呋与禽流感油佐剂疫苗混合存在多方面隐患，两种剂型均无法与疫苗稳定混合，高浓度破坏W/O结构，头孢噻呋盐酸盐破坏更严重，导致吸收不良、抗体效价降低，增加免疫失败风险，还会升高应激指标、降低抗氧化能力。不过，头孢噻呋能逆转疫苗对雏鸡增重的抑制，头孢噻呋钠促生长效果更优，且可恢复肠道菌群多样性、减少有害菌，盐酸盐则相反。当前禽类养殖中抗生素与疫苗联用普遍，但需依剂型、浓度谨慎选择。未来应研发适配油佐剂疫苗的抗生素新剂型，探索“低剂量抗生素+益生菌”方案，开展长期田间试验，制定科学规范，保障畜牧业健康发展与公共卫生安全。

参考文献：

SHEN X H,ZHANG A Y,ZHAO R H,et al.Effects of adding antibiotics to an inactivated oil-adjuvant avian influenza vaccine on vaccine characteristics and chick health [J].Poultry Science,2024,103:104135.