突破血清型壁垒！非洲马瘟 DISA-DIVA 疫苗平台问世，全覆盖 9 种致病血清型

研究背景

非洲马瘟（AHS）由非洲马瘟病毒（AHSV）引起，对马致死率达95%，借库蠓传播，在非洲致巨大经济损失，且已扩散至欧洲、泰国等地。现有减毒活疫苗（LAVs）存残留毒力、易重组返强风险，且无法区分接种与感染（无DIVA特性）。反向遗传学推动新型疫苗研发，AHSV的NS3/NS3a蛋白为毒力与传播关键，其编码基因（Seg-10）缺失可实现安全与DIVA兼容，为构建DISA-DIVA平台奠定基础。

关键突破

疫苗平台构建：靶向缺失Seg-10，奠定安全与DIVA基础

团队筛选减毒AHSV4LP为骨架（比强毒AHSV更具免疫原性且易培养），通过反向遗传学在其Seg-10中删除231bp（对应77个氨基酸，含LateDomain），构建delSeg-10。该缺失彻底消除病毒毒力与库蠓传播能力，且无回复突变风险；基因组分析显示，平台含8个AHSV4LP来源片段，仅需交换血清型特异性片段即可适配不同血清型，为多血清型疫苗开发提供统一框架（图1、表1）。

9种血清型疫苗rescue：交换关键片段，实现全血清型覆盖

通过交换编码血清型特异性外壳蛋白VP2（Seg-2）和VP5（Seg-6）的片段，成功拯救出DISA1-DISA9（对应9种AHSV血清型）。免疫过氧化物酶单层试验（IPMA）验证，疫苗与对应血清型抗VP2血清特异性结合，仅相关血清型（如DISA3与DISA7）出现轻微交叉反应；Sanger测序与全基因组测序确认，疫苗Seg-2/6片段正确且无外源污染，证明血清型交换精准可行（图2：、表4A）。

 病毒生产与稳定性：高滴度易制备，遗传特性稳定

在BSR和VeroE6细胞中培养DISA1-DISA9，工作种子（p2）滴度达6.6-9.0log₁₀TCID₅₀/mL，与亲本AHSV4LP相当，满足大规模生产需求；全基因组测序显示，仅6种疫苗存在1-3个氨基酸突变（多位于结构蛋白，不影响功能），DISA2/4/9无任何突变，且疫苗在4℃可稳定保存6个月、-80℃保存1年，为实际应用提供便利（表4B）。

DIVAPCR开发：精准区分接种与感染，性能媲美标准检测

针对delSeg-10缺失区域设计2对引物和1条探针，开发配套DIVAPCR。该检测对野毒AHSV灵敏度与泛AHSVPCR相当（Ct值略低），可检测所有Seg-10谱系，且不识别DISA疫苗；pony接种实验显示，疫苗接种后DIVAPCR始终阴性，野毒攻毒后3-5天即可检出；2023年能力验证中，其结果与欧盟参考实验室检测完全一致，为疫苗接种后的疫病监测提供关键工具（图5、表5）。

结论与展望

本研究成功构建首个覆盖AHSV全9种血清型的DISA-DIVA疫苗平台，通过Seg-10缺失实现疫苗安全与DIVA特性，血清型片段交换技术解决多血清型防控难题，且疫苗易培养、稳定性高，配套检测精准可靠。目前疫苗已完成全面体外验证，下一步需开展马体接种-攻毒实验评估效力。未来可基于该平台开发多血清型混合疫苗，优化冷链运输条件，推动其在非洲、东南亚等疫区应用，助力非洲马瘟的防控与贸易安全保障。

参考文献

van Rijn PA, Wernery U, Feddema AJ, et al. Development of African horse sickness disabled infectious single animal (DISA)-DIVA vaccine platform applied for all nine serotypes. Vaccine 64 (2025) 127772